一種跟蹤活細(xì)胞中細(xì)胞周期動(dòng)態(tài)的非侵入性方法

用于檢測(cè)活細(xì)胞中 PCNA 的新工具 Cell Cycle Chromobody 可讓您實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞周期。Chromobody 的小尺寸產(chǎn)生了高信噪比，令人驚嘆的高分辨率圖像或延時(shí)電影清楚地顯示了活躍分裂細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制位點(diǎn)的點(diǎn)狀模式。只需使用 Cell Cycle Chromobody 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染您選擇的細(xì)胞系。該質(zhì)粒包含與 TagRFP (Evrogen) 融合的 PCNA 特異性羊駝抗體序列。大家都知道，PCNA 是一種支架蛋白，可幫助將 DNA 加工酶錨定和募集到整個(gè)染色質(zhì)的適當(dāng)位點(diǎn)。轉(zhuǎn)化后，您的細(xì)胞將表達(dá)細(xì)胞周期染色體。瞬時(shí)結(jié)合不影響細(xì)胞活力或細(xì)胞周期各個(gè)階段的進(jìn)展，

U2OS細(xì)胞系穩(wěn)定表達(dá)與紅色熒光蛋白TagRFP融合的細(xì)胞周期染色體

上面的面板顯示了細(xì)胞周期 Chromobody-TagGFP2 [不再可用] 如何在 36 小時(shí)的時(shí)間過(guò)程中清楚地跟蹤細(xì)胞，其中它經(jīng)歷了 2 輪分裂。次分裂后，子細(xì)胞在 10 小時(shí)左右進(jìn)入 S 期，顯示出 PCNA 的特征點(diǎn)狀模式。29 小時(shí)標(biāo)記顯示其中一個(gè)子細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂（前中期），第二個(gè)在第 30 小時(shí)緊隨其后。對(duì)于活細(xì)胞成像，將細(xì)胞接種在 ibidi µ 載玻片中。在配備 63x/1.4 NA Plan-Apochromat 油浸物鏡和加濕、溫度和 CO2 控制的活細(xì)胞室的旋轉(zhuǎn)圓盤顯微鏡（UltraVIEW VoX，PerkinElmer）上獲取時(shí)間序列。TagGFP2 被 488 nm 激光線激發(fā)，通常在 100-500 毫秒/圖像之間，激光強(qiáng)度設(shè)置為大值。25%。每 30 分鐘以 1000×1000 像素的幀大小、100 nm 的像素大小和 400 nm 的 z 步長(zhǎng)大小記錄活細(xì)胞的共聚焦圖像 z 堆棧。顯示的圖像是幾個(gè)中 z 截面的大強(qiáng)度投影。

染色體將你的細(xì)胞變成免疫報(bào)告工廠

納米抗體是*的小抗體片段，可與靶蛋白非常有效地結(jié)合。在動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的納

米抗體可以被收集并用于體外研究。當(dāng)納米抗體被表達(dá)為與 GFP 等報(bào)告分子的融合體

時(shí)，發(fā)生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)結(jié)合。此外，使用正確的載體和啟動(dòng)子，結(jié)合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質(zhì)融合提供了一個(gè)很好的替代方案，用于免疫定位研究。為什么？因?yàn)?GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變?nèi)诤系鞍椎幕钚浴?/span>相比之下，

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動(dòng)物家族（駱駝、美洲駝和羊駝）產(chǎn)生沒(méi)有輕鏈的功能性抗體，即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過(guò)單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域識(shí)別并結(jié)合其抗原。當(dāng)從它們的羧基尾部切下時(shí)，這些桶狀結(jié)構(gòu) (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結(jié)合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內(nèi)的親和力和亞納摩爾范圍內(nèi)的解離常數(shù)（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點(diǎn)。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達(dá) 70°C 的溫度下極為穩(wěn)定，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發(fā)揮作用。這些小而強(qiáng)大的抗體片段可用于各種*的應(yīng)用。他們將打開(kāi)您的研究可能性。