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BD PAXgene全血RNA采集管產品詳細信息
PAXgene血液RNA系統由PAXgene血液RNA管(可從BD，貓。不。762165)用于血液采集、穩定和運輸，PAXgene血液RNA試劑盒用于硅膠膜RNA分離和自旋柱格式的純化。凈化可以手工進行，使用微量離心機，或在QIAcube自動進行。ce - ivd標記管和試劑盒提供精確的性能規格，確保高度可靠的RNA純化。
性能
PAXgene血液RNA管的目的是收集的全血和穩定細胞內RNA長達3天的年齡在18歲至25歲之間°C(見圖“RNA穩定°C:年齡在18歲至25歲之間的安全系數"和“RNA穩定°C:年齡在18歲至25歲之間IL1B")或5天2 - 8°C(見圖“RNA穩定在2 - 8°C:安全系數"和“RNA穩定在2 - 8°C: IL1B")。目前可用的數據顯示，細胞RNA在-20°C或-70°C下至少可以穩定96個月。
使用PAXgene Blood RNA System純化的總RNA純度高，A260/A280值在1.8 - 2.2之間，≤1.0% (w/w)基因組DNA。當使用高達30%的洗脫液時，至少95%的樣品在RT-PCR中沒有顯示抑制作用。
平均樣品制備時間(基于12個樣品制備的數據)約為90分鐘，只有40分鐘的動手時間。在處理過的樣本中，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA產量≥3µg。由于產量高度依賴于捐助者，個別產量可能有所不同。個人捐贈者,PAXgene血液RNA系統提供高度可再生的和可重復的收益率(見圖“可再生的和可重復的RNA凈化"和“重復性和再現性的RNA收益率")和可重復的和可重復的rt - pcr(見圖“用戶之間的重現性"和“再現性工具包之間很多",和表格)，使其在臨床診斷測試中非常可靠。
經處理的樣本中，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA產量≥3 μg。圖“RNA產率和純度-自動化處理"表示的是由3個操作員使用3個試劑盒批次的自動化方案制備的共288個樣品的RNA產率。由于這些研究使用的是匯集的血液樣本，而不是單獨的PAXgene血液RNA管，因此結果不能反映單個血樣的RNA產量。由于產量高度依賴于捐助者，個別產量可能有所不同。
當使用高達30%的洗脫液時，至少95%的樣品在RT-PCR中沒有顯示抑制作用。使用自動化程序，通過定量、實時RT-PCR檢測rna陰性樣本(水)和rna陽性樣本(人類全血)的β -球蛋白和FOS轉錄本序列，無法檢測樣品之間的交叉污染。
用PAXgene血RNA系統純化的RNA和自動化的協議是高純度的，因為缺乏RT-PCR抑制(見上文)和A260/A280值在1.8和2.2之間。通過對β -肌動蛋白基因序列的實時定量PCR檢測，在≥95%的樣本中，基因組DNA含量≤1% (w/w)。圖“RNA產量和純度-自動化處理"顯示了使用3個試劑盒批次的自動化方法制備的共288個樣品的A260/A280值和相對基因組DNA。
使用PAXgene血RNA系統的RNA純化自動化方案提供了高重復性和可重復性的RT-PCR結果，如圖“自動和手動方案之間的重現性"所示，這使得它在臨床診斷測試中非常可靠。
過程
PAXgene Blood RNA程序簡單，可以使用手動或自動程序進行(見流程圖“手動PAXgene Blood RNA程序"和“自動PAXgene Blood RNA程序")。
手動PAXgene血液RNA程序
將重懸的顆粒與蛋白酶K一起孵育在優化的緩沖液中，以實現蛋白質消化。通過PAXgene Shredder旋轉柱進行額外的離心，使細胞裂解液均質并清除殘留的細胞碎片，并將流過部分的上清液轉移到新鮮的微型離心管中。加入乙醇調節結合條件，將裂解液應用于PAXgene RNA自旋柱。在一個簡短的離心過程中，當污染物通過時，RNA被選擇性地結合到PAXgene硅膜上。在幾個有效的清洗步驟中去除剩余的污染物。在第一和第二沖洗步驟之間，用DNase I處理膜以去除微量的結合DNA。洗滌步驟結束后，RNA在洗脫緩沖液中洗脫并熱變性。
全自動PAXgene血液RNA程序
QIAcube全自動樣品制備，遵循與手動程序相同的步驟，使您可以繼續使用PAXgene血液RNA試劑盒純化高質量的RNA。
自動RNA純化協議包括兩部分(或協議)，“PAXgene Blood RNA Part A"和“PAXgene Blood RNA Part B"，在這兩部分之間有一個簡短的人工干預。
將離心、洗滌、重懸的核酸顆粒從PAXgene Blood RNA Tube轉移到加工管中，加工管放置在QIAcube工作臺上的熱搖器單元中。操作者從菜單中選擇并啟動“PAXgene Blood RNA Part A"協議。QIAcube完成了在洗脫緩沖液中進行RNA洗脫的步驟。操作人員將含有純化RNA的微離心管轉移到QIAcube的熱激器單元中。操作者從菜單中選擇并啟動“PAXgene Blood RNA Part B"協議，QIAcube進行熱變性。
平均樣品制備時間(基于12個樣品制備的數據)是125分鐘，只有大約20分鐘的動手時間。
BD PAXgene全血RNA采集管應用程序
當該試劑盒與PAXgene血液RNA管一起使用時，該系統提供全血的細胞內RNA用于分子診斷檢測的RT-PCR。
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