Promocell培養基的配制與準備:
1.成分添加準確性
按照產品說明書精確稱量和添加各種成分。例如,對于干粉培養基,要確保每種成分如氨基酸、維生素、無機鹽等都準確無誤地加入。
注意添加順序,一般先加入基礎培養基成分,再添加血清、生長因子等添加劑。因為血清中含有多種蛋白和因子,如果添加順序錯誤,可能會引起蛋白沉淀等問題。
2.溶解和混合均勻
將稱量好的成分加入到適量的溶劑(通常是蒸餾水或去離子水)中。對于含有難溶成分的培養基,可能需要加熱或攪拌輔助溶解。
采用適當的攪拌方式,如磁力攪拌或機械攪拌,確保培養基成分完*混合均勻。不均勻的培養基可能導致細胞在不同位置接受的營養和環境條件不一致,影響細胞生長和實驗結果。
3.過濾除菌
配制好的培養基必須進行過濾除菌,通常使用0.22μm的濾膜。這是為了保證培養基中沒有細菌、真菌等微生物污染,為細胞提供一個無菌的生長環境。
過濾時要確保濾膜的完整性,防止濾膜破損導致除菌失敗。可以采用真空過濾裝置或正壓過濾裝置,并且要注意過濾裝置的無菌操作,避免二次污染。
Promocell培養基的儲存和使用:
1.儲存條件
未使用的培養基應儲存在2-8℃的冰箱中,避免冷凍,因為冷凍可能會破壞培養基中的一些成分,如血清中的蛋白等。
注意避光保存,特別是含有光敏感成分的培養基。有些成分在光照下可能會發生分解或變性,影響培養基的質量。
2.預熱
在使用前,應將培養基預熱到37℃左右,這是因為細胞培養通常在37℃的恒溫環境下進行。可以將培養基放置在水浴鍋中預熱,但要注意防止水浴鍋的水進入培養基造成污染。
3.使用時效
配制好的培養基一般有一定的使用期限。例如,添加了血清的培養基在4℃下保存不宜超過一個月,最好在兩周內使用。因為隨著時間的推移,培養基中的營養成分會逐漸降解,血清中的活性成分也會失活,而且長時間保存會增加微生物污染的風險。
4.細胞接種密度
在接種細胞時,要根據細胞類型和實驗目的控制合適的接種密度。如果接種密度過高,細胞會因為營養物質競爭和空間限制而生長不良;接種密度過低,則可能無法達到實驗所需的細胞數量。例如,對于貼壁細胞,一般每平方厘米接種1-10?個細胞比較合適,但具體數值因細胞種類而異。

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