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熒光分光光度計(jì)維生素C含量測定上的應(yīng)用
依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5413.18-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素C的測定》，應(yīng)用天津博精CMF-300型熒光分光光度計(jì)對嬰幼兒乳品中維生素C的含量進(jìn)行測定。結(jié)果證明此方法操作簡便，線性良好是測定食品中維生素C含量的理想方法。
關(guān)鍵詞： 熒光分光光度法 維生素C 抗壞血酸 食品 嬰幼兒乳品
· 原理
維生素C（抗壞血酸）在活性炭存在下氧化成脫氫抗壞血酸，它與鄰苯二胺（OPDA）反應(yīng)生成熒光物質(zhì)（喹唔啉），用熒光分光光度計(jì)測定其熒光強(qiáng)度，其熒光強(qiáng)度與維生素C的濃度成正比。
脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復(fù)合物不與鄰苯二胺反應(yīng)，以此排除試樣中熒光雜質(zhì)產(chǎn)生的干擾。
· 實(shí)驗(yàn)條件
儀器及附件：
CMF-300型熒光分光光度計(jì)
熒光石英比色皿
分析條件：
激發(fā)波長：350nm
發(fā)射波長：430nm
藥品：
淀粉酶、偏磷酸、乙酸、活性炭、鹽酸、亞鐵氰化鉀、結(jié)晶乙酸鈉、硼酸、鄰苯二胺、維生素C標(biāo)準(zhǔn)品。
其它：
分析天平（0.0001g）、烤箱、水浴鍋、80～200目篩子、研缽、抽濾裝置、稱量紙、藥勺、量筒、容量瓶、具塞三角瓶、漏斗、濾紙、移液管、具塞比色管、燒杯、擦鏡
紙、玻璃棒、膠頭滴管等。
· 實(shí)驗(yàn)流程
樣品前處理：
樣品前處理步驟如下圖所示：
圖1 樣品前處理流程圖
備注：樣品稱樣量依據(jù)其本身維生素C含量（約2mg）而定。淀粉酶活力為1.5U/mg，根據(jù)活力單位大小調(diào)節(jié)用量。
樣品待測液制備：
樣品經(jīng)前處理后還需進(jìn)行進(jìn)一步的處理才可以上機(jī)進(jìn)行檢測。
樣品待測液制備步驟如下圖所示：
圖2 樣品空白溶液待測液和樣品溶液待測液配制流程圖
備注：樣品稱樣量依據(jù)其本身維生素C含量（約2mg）而定。淀粉酶活力為1.5U/mg，根據(jù)活力單位大小調(diào)節(jié)用量。
標(biāo)準(zhǔn)樣品待測液制備:
精密稱取0.050g維生素C標(biāo)準(zhǔn)品，用偏磷酸-乙酸溶液A溶解并定容至50mL，再準(zhǔn)確吸取10.0mL該溶液用偏磷酸-乙酸溶液A稀釋并定容至100mL，配制成100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
準(zhǔn)確吸取經(jīng)過處理的VC標(biāo)準(zhǔn)溶液（10μg/mL）0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分別置于10mL試管中，補(bǔ)水至2.0mL，配制成VC標(biāo)準(zhǔn)樣品工作液。再分別加入5mL鄰苯二胺（OPDA）溶液，搖勻避光靜置60min，即配制成VC標(biāo)準(zhǔn)樣品待測液。
標(biāo)準(zhǔn)樣品待測液制備步驟如下圖所示：
圖3 VC標(biāo)準(zhǔn)空白溶液待測液和VC標(biāo)準(zhǔn)系列溶液待測液配制流程圖
· 測定結(jié)果
式中：
X——試樣中維生素C的含量，單位為毫克每百克（mg/100g）；
V——試樣的定容體積，單位為毫升（mL）；
c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣測定液中維生素C的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；
f——試樣稀釋倍數(shù)。
· 結(jié)論
采用熒光分光光度法測定食品中維生素C含量，操作簡單，方法準(zhǔn)確，是一種理想的方法。
由于維生素C本身易光解而且在測定過程中需要對每一種樣品進(jìn)行樣品的背景扣除，因此，此實(shí)驗(yàn)對儀器的功能要求更高。CMF-300型熒光分光光度計(jì)在硬件上采用了激發(fā)側(cè)擋光快門的設(shè)置，從而避免了樣品被強(qiáng)光的直接照射；軟件上采用了的雙背景扣除功能，自動計(jì)算維生素C濃度，使整個實(shí)驗(yàn)操作簡便，結(jié)果重現(xiàn)性良好。