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in vivo Advanced 活體動物體內轉染試劑

1. 描述

in vivo Advanced 活體動物體內轉染試劑可以通過靜脈注射或體內局部組織注射的方式完成轉染過程。此外，轉染過程中總注射體積較小，致密組織可通過顯微注射來完成轉染，且轉染復合物在體內循環時間較長。DNA，siRNA 及共轉染均可用此款轉染試劑來完成轉染操作。

2. 基本條件

1> DNA

濃度: 300 ng/ul - 2 μg/ul;

溶劑: 質粒 DNA 需溶于雙蒸水或超純水;

內毒素: 去內毒素

2> RNA 濃度: 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM

3. 活體動物體內轉染操作步驟

1> 轉染復合物制備: 核酸和轉染試劑直接按照 1:1 混合。之后用移液器吹打混合溶液 10-15 次以充分混勻。將混合溶液于室溫環境中靜置 10-15 分鐘，轉染復合物即可制備結束。在復合物制備過程中，離心管的管壁要確保沒有液體殘留。

2> 用注射器或顯微注射針完成靜脈注射或局部組織注射操作。

3> 注射后 3-5 天，轉染效率可達到峰值，靶基因的表達量可于此時進行檢測。

活體動物體內轉染注射用量

4. 注意事項

1> DNA (μg) 或 20 μM siRNA (μl)與轉染試劑的比例為 1:1。

2> 上表中 siRNA 的注射體積是針對 20 μM siRNA 的。如果 siRNA 的濃度為 40 μM，則注射體積需減半；如果 siRNA 的濃度為 80 μM，則注射體積需為表中體積的 1/4；以此類推。

3> 進行局部組織注射實驗時，轉染復合物的用量為 5-10 μl/cm2。

4> 進行共轉染實驗時，核酸總用量應和上表中用量一致，各種核酸用量的比例應根據實驗目的進行調整。之后將各種核酸與轉染試劑進行充分混合。

5> 在具體實驗操作過程中，核酸和轉染試劑的用量可根據上表中最大注射用量進行適當調整。