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引起高效液相色譜出現(xiàn)故障的因素有哪些
閱讀：772 發(fā)布時(shí)間：2023-3-22
高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入檢測(cè)系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的“吸附-解吸”的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣本濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測(cè)結(jié)果。
高效液相色譜儀出現(xiàn)的故障是有哪些因素引起的
(一)保留時(shí)間變化
1.柱溫變化 柱恒溫，必要時(shí)需配置恒溫箱
2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱
3.緩沖液容量不夠用 》25mmol/L的緩沖液
4.柱污染 每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化 穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相
6.柱快達(dá)到壽命 采用保護(hù)柱
(二)保留時(shí)間縮短
1.流速增加 檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載 降低樣品量
3.鍵合相流失 流動(dòng)相pH值保持在3~7.5，檢查柱的方向
4.流動(dòng)相組成變化 防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加 柱恒溫
(三)保留時(shí)間延長(zhǎng)
1.流速下降 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化 用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿質(zhì)鈍化柱
3.鍵合相流失
4.流動(dòng)相組成變化
5.溫度降低
(四) 出現(xiàn)肩峰或分叉
1.樣品體積過(guò)大 用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng) 采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線(xiàn)過(guò)濾器,過(guò)濾樣品
5.進(jìn)樣器損壞 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子
(五)鬼峰
1.進(jìn)樣閥殘余峰 每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物 處理樣品
3.柱未平衡 重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜)
4.每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相) 通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水
(六) 基線(xiàn)噪聲
1.氣泡(尖銳峰) 流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機(jī)噪聲) 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑
3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲 更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲) 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)
5.檢測(cè)器中有氣泡 流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
(七)峰拖尾
1.柱超載 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾 清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相
3.硅羥基作用 加三乙胺,用堿質(zhì)鈍化柱，增加緩沖液或鹽的濃度，降低流動(dòng)相pH值，鈍化樣品
4.死體積或柱外體積過(guò)大 連接點(diǎn)降至至低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管
5.柱效下降 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱
(八)峰展寬
1.進(jìn)樣體積過(guò)大
2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)
4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大 設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%
5.流動(dòng)相粘度過(guò)高 增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相
6.檢測(cè)池體積過(guò)大 用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過(guò)大 將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最小
9.樣品過(guò)載 進(jìn)小濃度小體積樣品