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細胞學堂 | 細胞拉絲的五大常見原因及解決方法

閱讀:1404      發布時間:2024-7-12
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通常情況下,細胞在體外培養環境中大多呈現扁平、多角形或圓形等形態,這些細胞形態對于細胞的營養吸收、分裂增殖及物質轉運等生理活動至關重要。然而,不少研究者在實際培養過程中會遇到細胞形態異常的問題,尤其是細胞出現“拉絲"現象。這一現象,往往伴隨細胞狀態變差,對實驗結果的準確性及實驗進展構成了不容忽視的影響。




本期細胞學堂,我們將為您詳細介紹細胞培養過程中出現拉絲現象可能的原因,并針對性提供解決方法,助您細胞培養無憂!





細胞拉絲常見原因及解決方法

拉絲為部分細胞的正常形態

某些細胞株在正常培養過程中,如SH-SY5Y(人神經母細胞瘤細胞)和K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨細胞),通過光學顯微鏡觀察(如圖1和2所示)細胞本身形態就有拉絲和觸角狀形態,是其正常形態。

圖片

圖1. SH-SY5Y細胞形態

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 圖2. K7M2 wt細胞形態

  解決方法:


在初次培養不熟悉的細胞過程中,若觀察到拉絲現象,首先建議參考權-威細胞庫提供的細胞圖片,以鑒別該細胞本身是否具有拉絲的形態特征。對于本身形態就存在拉絲特征的這類細胞,無需針對拉絲現象進行特殊處理。然而,如果經過對比明確細胞本身不具有拉絲的形態特征,且伴隨有細胞增殖變慢或其他改變時,那么就需要進一步排查可能的原因。




細胞接種密度過高或過低

細胞接種密度過高時,細胞之間的營養和空間競爭會加劇,這種競爭壓力可能導致細胞形態拉絲。若使用無血清培養基培養間充質干細胞,接種密度過低,也可能導致細胞長不起來,細胞形態會逐漸伸長拉絲。

  解決方法:


根據細胞的特性,選擇合適的接種密度,并定期進行細胞傳代,將細胞密度維持在合適范圍內。




培養條件不當

如培養基配方錯誤、培養基中關鍵營養物質(如氨基酸、維生素、生長因子等)不足、pH值變化、溫度波動或氣體環境(如CO?濃度)不適宜,均可能影響細胞正常形態與功能,導致細胞拉絲。

  解決方法:


使用新鮮配制的培養基培養細胞;根據細胞的生長情況,及時換液,確保培養過程中營養充足;必要時可嘗試提高血清使用濃度(終濃度不超過20%)更換高品質胎牛血清(如圖3所示)

圖片

圖3. Renca(小鼠腎癌細胞)細胞形態




操作不當

在處理如貼壁細胞等需要消化的細胞時,解離試劑的選擇、消化時間的控制、操作力度的把握等都至關重要。解離試劑選擇不當、消化時間過長或操作力度過大等均可能導致細胞受損,進而引發細胞形態改變,出現拉絲現象。

  解決方法:


針對不同細胞選擇合適的解離試劑,控制消化時間,在消化過程中操作輕柔,最-大程度降低消化過程對細胞的損傷。




細胞污染

在細胞培養的過程中,若出現細菌、真菌、支原體、黑膠蟲等污染,其與細胞爭奪營養,同時產生有細胞毒性的代謝產物,將會導致細胞狀態明顯變差,細胞可能出現拉絲現象。

  解決方法:


提高細胞培養過程中的無菌操作意識,使用無菌試劑、耗材。對于支原體、黑膠蟲等不易察覺的污染,可以定期檢測或空培確定是否發生污染。及時發現,及時處理,有效防止污染范圍的擴大。



以上就是關于細胞拉絲原因及解決方法的詳細解讀,更多細胞培養干貨,請持續關注細胞學堂專欄~


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