RwPE-2人前列腺正常細胞

細胞介紹

該細胞來源于54歲白人男性。源于正常成人前列腺周邊組織的上皮細胞經過轉染HPV-18后建系得到該細胞株。在三維基質膠培養時，在雄激素作用下，RWPE-1細胞形成腺胞并向培養基中分泌PSA（kallikrein 3, KLK3）。來源于RWPE-1的細胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細胞株和 RWPE2-W99細胞株。同時，用N-甲醇-N-硝ji脲處理RWPE-1，建立了一系列模擬前列腺癌進程中不同時期的成瘤細胞株， 分別是 WPE1-NA22, WPE1-NB14, WPE1-NB11 和 WPE1-NB26 細胞株。 據提供者報道，RWPE-1 細胞株經過檢測，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。

細胞特性

1） 來源：前列腺正常細胞

2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

RwPE-2人前列腺正常細胞

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的*培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。                     

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備 角質細胞無血清培養基 (推薦：0019培養基，包含兩個組份：基礎培養基1瓶+生長因子1管）或者 Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019) ，添加對應因子，1% P/S 來培養細胞。

備注:Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培養液包含兩個組份：基礎培養基1瓶（貨號10785-012）+生長因子1管( 貨號10784-015）。

2）注意：使用0.05%胰酶消化細胞，由于Defined K-SFM為無血清培養液無法終止胰酶消化，所以消化完成后要通過離心（建議125xg離心5到10分鐘）去除胰酶或者用帶10%血清的培養基來終止消化，再進行后續操作。

3）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

4）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。