1、棄去培養基廢液。
2、消化：加入1ml 0.125％胰酶溶液，轉動培養瓶使酶液浸沒瓶底，溫浴消化2-3分鐘。
3、終止：用無血清培養基終止酶反應。
4、離心：收集中和了的培養液，于15ml 的離心管中 1000rmp 離心10分鐘。
5、細胞重懸：棄去上清，加入1ml 無血清培養基用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液。
6、細胞計數：血球計數板計數細胞，并換算出細胞數量。
7、接種分瓶： 將細胞接種到含4ml無血清培養基的培養瓶中，37℃，5% CO₂培養箱中培養。
8、鏡檢觀察：次日觀察貼壁率，細胞形態等。