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一、永生化牛胃上皮細胞簡介：雖然原代牛胃上皮細胞最更能真實地反映胃上皮細胞在牛體內的生理狀態，但是一方面由于原代分離培養牛胃上皮細胞周期長及對技術人員經驗要求較高，另一方面此原代細胞在體外不能傳代，每次取材和分離培養原代牛胃上皮細胞比較麻煩，這些不利因素制約了原代牛胃上皮細胞在實驗室的廣泛應用

一、永生化牛胃上皮細胞簡介：

雖然原代牛胃上皮細胞最更能真實地反映胃上皮細胞在牛體內的生理狀態，但是一方面由于原代分離培養牛胃上皮細胞周期長及對技術人員經驗要求較高，另一方面此原代細胞在體外不能傳代，每次取材和分離培養原代牛胃上皮細胞比較麻煩，這些不利因素制約了原代牛胃上皮細胞在實驗室的廣泛應用。我公司的研究團隊擁有多年原代細胞分離培養及細胞永生化服務研究經驗，成功建立了永生化牛胃上皮細胞。
胃上皮細胞具有很高的更新速度，各種上皮細胞具有不同的代謝周期，處于一種動態的、精致的平衡之中。胃粘膜由許多胃單位構成的，每個胃單位由頂細胞、壁細胞、主細胞、頸粘液細胞、多能干細胞以及少量的內分等多種上皮細胞組成,其中頂細胞、壁細胞、主細胞是胃粘膜最主要的三種細胞。各種上皮細胞均來源于峽部的多能干細胞，每種細胞具有不同的功能和更新速率。細胞分化、增殖和凋亡的改變直接影響到胃粘膜結構的穩定,是導致胃相關疾病發生的原因。
本公司生產的永生化牛胃上皮細胞采用酶解法和基因轉染制備而來，細胞總量約為1×10⁶/T25方瓶，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
二、使用方法

1 、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中靜置 2-3 小時，以穩定細胞狀態，然后打開瓶子回收瓶子中培養液作為后續培養此細胞的培養液（備注：先使用瓶子中培養液培養及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己完全培養液培養觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養液不適合細胞生長造成細胞狀態不好或死亡） ，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 10ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養箱中培養；
4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3 、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（培養液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 培養液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養液混勻細胞，將細胞懸液轉移至 T25 培養瓶中，放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中培養；
3）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。

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