T7 大腸桿菌表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
組成 BC206-01 BC206-02
T7 Express Competent cells 10×100μl 20×100μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl 5μl
儲(chǔ)存條件：-70℃保存，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品說(shuō)明：
T7 Express 菌株為大腸桿菌 BL21 增強(qiáng)型菌株，為 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型，主要適用于含有 T7 啟動(dòng)
子的原核表達(dá)載體（如 pET 等）的蛋白表達(dá)，同樣適用于需要大腸桿菌 RNA 聚合酶來(lái)轉(zhuǎn)錄 RNA 的非 T7 啟動(dòng)
子的表達(dá)載體（如 pGEX 等）。該菌株區(qū)別于 BL21(DE3)菌株的優(yōu)勢(shì)在于 T7 RNA 聚合酶基因整合在細(xì)菌染色
體上的 lac 操縱子區(qū)域，基因組中無(wú)λ前噬菌體序列，并具有抗 T1 噬菌體感染等特點(diǎn)。T7 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)
特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率大于 10 8 cfu/μg。
基因型：
fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1
(mcrCmrr)114::IS10
菌株抗性：對(duì)氨芐，，，，和四環(huán)素敏感。
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化步驟：
1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入質(zhì)粒 DNA 或 5-10μl 連接產(chǎn)物到細(xì)胞中，用手
指管底，輕輕混勻；
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動(dòng)；
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動(dòng)；
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動(dòng)；
5. 加入 500μl 無(wú)菌的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基；
6. 置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng) 60 分鐘；
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。
（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸
頭輕輕吹打散菌塊，取 10μl 重懸的菌液分多點(diǎn)滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的
液體來(lái)回劃線。這個(gè)方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）
（質(zhì)粒快速轉(zhuǎn)化步驟：將步驟 2 的時(shí)間縮短到 5 分鐘，對(duì)于氨芐抗性的質(zhì)粒，步驟 4 完成后，可直接涂
布或劃線于含氨芐抗性的 LB 平板上。其它抗性的質(zhì)粒仍需 60 分鐘的復(fù)蘇培養(yǎng)。）
蛋白表達(dá)步驟：
1. 挑取單菌落，接種到含 5ml 帶抗生素的 LB 培養(yǎng)基中；
2. 37℃，200rpm 震蕩培養(yǎng)細(xì)菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（OD600=0.4-0.8）；
3. 加入 IPTG 到終濃度為 0.4mM，37℃誘導(dǎo) 2-4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過(guò)夜；
4. 誘導(dǎo)完成后，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍(lán)染膠法，Western-Blot法或酶活性分析法）
分析菌體裂解物的總蛋白、上清和沉淀組分，明確表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)狀況（可溶性或不溶性表達(dá)）；
5. 大量表達(dá)時(shí)，可用10ml過(guò)夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到1L培養(yǎng)基中，當(dāng)培養(yǎng)到OD600=0.4-0.8時(shí)，加入終濃度為0.4mM
的 IPTG，37℃誘導(dǎo) 2-4 小時(shí)或 16℃誘導(dǎo)過(guò)夜（不同蛋白表達(dá)的條件有所不同，需在實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化）。


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抗體：兔多抗、鼠單抗種類(lèi)豐富，一抗 1 萬(wàn)余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項(xiàng)發(fā)明，原核表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定表達(dá)蛋白 1000 余種。


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