一、小鼠胰腺上皮細胞簡介 胰腺上皮細胞包括β細胞、導管細胞、腺泡細胞及α細胞
一、小鼠胰腺上皮細胞簡介
胰腺上皮細胞包括β細胞、導管細胞、腺泡細胞及α細胞。它們可通過不同途徑重新生成β細胞從而實現β細胞的再生。已分化的β細胞可以被誘導增殖或者返回至祖細胞狀態重新分化為β細胞。而在胰腺受損、代謝應激、基因操作等條件下,其他胰腺上皮細胞可能直接轉分化為β細胞或者成為內分泌兼性祖細胞再分化為β細胞。
本公司生產的小鼠胰腺上皮細胞采用酶解法制備而來，細胞總量約為5×105/T25方瓶，CK-18、CK-19免疫熒光染色呈陽性，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中靜置 2-3 小時， 以穩定細胞狀態，然后打開瓶子回收瓶子中培養液作為后續培養此細胞的培養液（備注： 先使用瓶子中培養液培養及盡快凍存保種細胞， 保存種子后再嘗試自己完全培養液培養觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養液不適合細胞生長造成細胞狀態不好或死亡） ，最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養。
2 、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液， 用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 10ml 培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 細胞培養箱中培養；
4）待細胞貼壁后， 觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3 、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液約 2ml 至培養瓶中 37 度培養箱放置 3-5 分鐘，倒置顯微鏡下觀察，待細胞基本脫落后加入培養基終止消化，用滴管混勻并將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm/min，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（培養液： FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁； 2）將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 培養液無菌離心管中，1000rpm 離心 5min ，然后加入 5ml 完全培養液混勻細胞， 將細胞懸液轉移至 T25 培養瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 細胞培養箱中培養；
3）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。
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