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產品名稱:Mccoy小鼠成纖維細胞、Mccoy小鼠成纖維細胞、Mccoy小鼠成纖維細胞、Mccoy小鼠成纖維細胞;產品基本信息 細胞名稱:McCoy,小鼠成纖維細胞 種屬來源:小鼠 組織來源:皮膚 細胞形態:成纖維細胞 生長特性:貼壁生長 培養基::90% DMEM+10% FBS+PS。 生長條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ 傳代方法:1:2至1:3,每周 3次 凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存 支原體檢測:無 細胞培養操作 1)復蘇細胞:將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。 2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。 a、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min(視細胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加2-3ml培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中,置于培養箱中培養。 3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例; a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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