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Rosetta(DE3) 大腸桿菌表達感受態細胞

產品信息：

組成 BC204-01 BC204-02

Rosetta(DE3) Competent 10×100µl 20×100µl

cells pUC19（0.1ng/µl） 5µl 5µl

儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。

產品介紹：

本公司生產的Rosetta(DE3)感受態細胞是采用大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株經特殊工藝處理得到的感受態細

胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達107 cfu/µg，-70℃保存幾個月轉化效率不發

生改變。每支感受態可以酌情分裝使用，降低了實驗的成本。質量穩定，使用方便，質優價廉。

基因型：F-ompThsdSB(rB- mB-)galdcmlacY1(DE3)pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL)(Camr )

抗生素耐藥性：細胞具有抗性。

產品特點：

該菌株是攜帶抗性質粒 BL21 的衍生菌，補充大腸桿菌缺乏的 6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA,

CUA,CCC, GGA)對應的 tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平。

操作步驟（以下操作均按無菌條件的標準進行）：

提示

感受態細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免降低感受態細胞的轉化效率。

進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。

為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到。

1. 取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。

（一次轉化感受態細胞的建議用量為 50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用 DNA 體積

不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。）以下實驗以 100μl 感受態細胞為例。

2. 向感受態細胞懸液中加入目的 DNA ，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置 30 分鐘。

3. 將離心管置于 42℃水浴中放置 60 秒鐘，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻 2 分鐘，該過程不

要搖動離心管。（此步驟也可將離心管置于室溫進行，時間不需十分準確，夏季或室溫較高時，可放

置

5-8 分鐘左右；如果室溫較低，可延長時間至 8-15 分鐘左右。條件允許建議使用 42℃熱激方法。）

4. 向每個離心管中加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養基（不含抗生素），混勻后置于

37℃ ，150rpm，搖床振蕩培養 60 分鐘，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5. 無菌條件下，取適量菌液加到含相應抗生素的 LB 固體培養基平板上，用無菌的細菌涂布器或玻璃珠將

細胞均勻涂開。等平板中的液體吸收后，倒置平板，37℃培養 12-16 小時。（涂布用量可根據具

體實驗來調整。轉化質粒在 10ng 左右，90mm 平皿涂布 100µl，55mm 平皿涂布 50µl；連接產物的轉

化菌液建議離心后倒掉大部分上清，余 200µl，取 100µl 用于涂布。）

6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，視平板上菌落生長情況決定去留。

相關試劑及培養基的制備方法：

1. LB 液體培養基：稱取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 燒杯中。加入約 800ml 的去

離子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液調節 pH 值至 7.0。加去離子水定容至 1L。分裝

后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。

2. SOB 和 SOC 培養基：稱取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 燒杯中加入約 800ml 的

去離子水，溶解后再補加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（約 0.2ml）調 pH 至 7.0。加入

去離子水將培養基定容至 1L。121℃滅菌 20 分鐘。使用時加入 5ml 滅菌的 2M MgCl2 溶液（此種培養

基稱為 SOB）。再補加經 0.22µm 過濾除菌的 1M 葡萄糖溶液 2ml（此種培養基為 SOC）。

3. 轉化復蘇細菌用的液體 LB 培養基或 SOC 培養基：可以一次高壓 50ml 液體培養基，無菌狀態按 1ml

每管分裝于高壓滅菌的 1.5ml 離心管中，裝于自封袋中，凍存于-20℃中，每次用一支。可以極大地避

免培養基污染和減少勞動量。

4. LB 固體選擇培養基：100ml LB 液體培養基中加入 1.5g 瓊脂粉，搖勻后，121℃高壓滅菌 20 分鐘。冷

卻至 50℃左右時加入相應濃度的抗生素（如 AMP 濃度通常為 100µg/ml），混勻后倒在細菌用的無菌

培養皿中，等瓊脂凝固后即可使用。

5. IPTG：稱量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 滅菌水，濃度為 200mmol/L。用無菌 0.22μm

過濾膜過濾除菌。小份分裝后，-20℃保存。

6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分裝（1ml/份）后，-20℃避光保存。

E 、感受態細胞
E-1 、大腸桿菌克隆感受態細胞
貨號	產品名稱	規格	單位
BC101-01	0 感受態細胞	100μl ×10	包
BC101-02	0 感受態細胞	100μl ×20	包
BC102-01	DH5α 感受態細胞	100μl ×10	包
BC102-02	DH5α 感受態細胞	100μl ×20	包
BC103-01	JM109 感受態細胞	100μl ×10	包
BC103-02	JM109 感受態細胞	100μl ×20	包
BC104-01	XL1-Blue 感受態細胞	100μl ×10	包
BC104-02	XL1-Blue 感受態細胞	100μl ×20	包
BC105-01	Mach 1-T1 感受態細胞	100μl ×10	包
BC105-02	Mach 1-T1 感受態細胞	100μl ×20	包
BC117-01	Turbo 感受態細胞	100ul ×10	包
BC117-02	Turbo 感受態細胞	100ul ×20	包
BC118-01	Stable 感受態細胞	100ul ×20	包
BC106-01	DH10B 感受態細胞	100μl ×10	包
BC106-02	DH10B 感受態細胞	100μl ×20	包
BC107-01	OmniMAX2-T1 感受態細胞	100μl ×10	包
BC107-02	OmniMAX2-T1 感受態細胞	100μl ×20	包
BC108-01	Stbl3 感受態細胞	100μl ×20	包
BC115-01	Stbl4 感受態細胞	100μl ×20	包
BC109-01	XL10-Gold 感受態細胞	100μl ×20	包
BC110-01	JM110 感受態細胞	100μl ×20	包
BC111-01	DB3. 1 感受態細胞	100μl ×20	包
BC112-01	DH10BAC 感受態細胞	100μl ×20	包
BC113-01	NEB 10-beta 感受態細胞	100μl ×20	包
BC114-01	BJ5183-AD- 1 感受態細胞	100μl ×20	包
E-2 、大腸桿菌表達感受態細胞
貨號	產品名稱	規格	單位
BC201-01	BL21(DE3) 感受態細胞	100μl ×10	包
BC201-02	BL21(DE3) 感受態細胞	100μl ×20	包
BC202-01	BL21(DE3) pLysS 感受態細胞	100μl ×10	包
BC202-02	BL21(DE3) pLysS 感受態細胞	100μl ×20	包
BC203-01	M15 感受態細胞	100μl ×10	包
BC203-02	M15 感受態細胞	100μl ×20	包
BC204-01	Rosetta(DE3) 感受態細胞	100μl ×10	包
BC204-02	Rosetta(DE3) 感受態細胞	100μl ×20	包
BC205-01	OrigamiB(DE3) 感受態細胞	100μl ×10	包
BC205-02	OrigamiB(DE3) 感受態細胞	100ul ×20	包
BC206-01	T7 表達感受態細胞	100μl ×10	包
BC206-02	T7 表達感受態細胞	100μl ×20	包
BC207-01	T7pLysY 感受態細胞	100μl ×10	包
BC207-02	T7pLysY 感受態細胞	100μl ×20	包
BC208-01	Shuffle T7-K12 感受態細胞	100μl ×10	包
BC208-02	Shuffle T7-K12 感受態細胞	100μl ×20	包
BC209-01	Shuffle T7-B 感受態細胞	100μl ×10	包
BC209-02	Shuffle T7-B 感受態細胞	100μl ×20	包
E-3 大腸桿菌電轉感受態細胞
貨號	產品名稱	規格	單位
BC401-01	NEB 10-beta 電轉感受態細胞	50μl ×20	包
BC402-01	BJ5183 電轉感受態細胞	50μl ×20	包
BC403-01	BJ5183-AD- 1 電轉感受態細胞	50μl ×20	包
BC404-01	0 電轉感受態細胞	50μl ×20	包
BC405-01	DH5α 電轉感受態細胞	50μl ×20	包
E-4 農桿菌感受態細胞
貨號	產品名稱	規格	單位
BC301-01	LBA4404 農桿菌感受態細胞	100ul ×20	包
BC302-01	AGL1 農桿菌感受態細胞	100ul ×20	包
BC303-01	EHA105 農桿菌感受態細胞	100ul ×20	包
BC304-01	GV3101 農桿菌感受態細胞	100ul ×20	包
E-5 、農桿菌電轉感受態細胞
貨號	產品名稱	規格	單位
BC305-01	LBA4404 農桿菌電轉感受態細胞	50μl ×20	包
BC306-01	AGL1 農桿菌電轉感受電轉態細胞	50μl ×20	包
BC307-01	EHA105 農桿菌電轉感受態細胞	50μl ×20	包
BC308-01	GV3101 農桿菌電轉感受態細胞	50μl ×20	包

南京萬木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向國內外市場專業研發、生產和銷售細胞、外泌體、ELISA 試劑盒、抗體、重組蛋白及相關試劑。產品在免疫學、信號轉導、代謝、神經科學等領域內都有科學文獻發表，被國內外多所大學、研究機構和藥學平臺使用并發表文獻多達1000多次。我公司憑借優異的產品和完善的服務體系現已受到廣大國內外用戶的青睞和認可。
品牌優勢
1、產品優勢：產品具有高特異性、回收率高、線性好、變異系數低、穩定性好；
2、質量保證：產品質量穩定，每批次產品必須通過 QA、QC 檢測才可出庫；
3、實力強大： 標準實驗室、研發中心，動物房；
4、技術支持：技術部 5*8 小時技術問題及時解答；
5、服務周到：發貨及時，三個工作日順豐快遞；售后無憂，包退包換。
6、研發、生產科研產品：ELISA 試劑盒：人、大小鼠、牛、兔、山羊、倉鼠、豬、馬、雞、犬、豚鼠、猴、綿羊等多種屬1000多種指標；
抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發明，原核表達系統穩定表達蛋白 1000 余種。