dam-/dcm-大腸桿菌感受態細胞
產品信息：
組成 BC122-01
dam-/dcm- 20×100?l
pUC19 質粒 5?l
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。不適合在液氮中保存。
產品介紹：
本公司生產的dam-/dcm-感受態細胞是采用大腸桿菌dam-/dcm-菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。
dam-/dcm-菌株來源于大腸桿菌K12菌株，該菌株為dam和dcm甲基化酶失活突變型菌株，常用于質粒DNA的去
dam和dcm甲基化處理，消除dam和dcm甲基化對酶切的影響。核酸內切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高質粒
DNA的產量和質量。甲基化酶的失活突變可能會導致質粒DNA在該菌株中會出現突變，不建議連接產物的轉
化實驗，僅用于質粒轉化。菌株還具有抗T1噬菌體感染的特點。pUC19質粒檢測轉化效率>×10 6 cfu/μg DNA。
基因型：ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10) TetS
endA1 rspL136 (StrR )dam13::Tn9 (CamR ) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2
菌株抗性：對、有抗性；對氨芐、、和四環素敏感。
質粒轉化步驟：
1.將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的質粒 DNA 到細胞中，用
手指管底，輕輕混勻。
2.冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動。
3.42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動。
4.冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動。
5.加入 500μl 的室溫 SOC 或 LB 培養基。
6.置于 37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復蘇培養 60 分鐘。
7.取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養 12-18 小時。
（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸
頭輕輕吹打散菌塊，取 10μl 重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液
體來回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落。此方法主要適用于質粒轉化，連接產物轉化用涂布法。）
（質?？焖俎D化步驟：將步驟 2 的時間縮短到 5 分鐘，對于氨芐抗性的質粒，步驟 4 完成后，可直接涂
布或劃線于含氨芐抗性的 LB 平板上。其它抗性的質粒仍需 60 分鐘的復蘇培養。）