Shuffle T7-K12 大腸桿菌表達感受態細胞
產品信息：
組成 BC208-01 BC208-02
ShuffleT7-K12 Competent cells 10×100μl 20×100μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl 5μl
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。
產品說明：
Shuffle T7-K12菌株來源于大腸桿菌K12菌株，適用于T7啟動子啟動的蛋白表達。細胞內組成型表達的二
硫鍵異構酶DsbC不僅有利于表達蛋白形成正確的二硫鍵，并具有分子伴侶的功能，幫助不含二硫鍵的蛋白正
確折疊。T7 RNA聚合酶基因整合在細菌染色體上的lac操縱子區域，組成型表達的lac阻遏蛋白能降低基因的背
景表達，有利于毒性蛋白的表達，沒有λ前噬菌體序列，具有抗T1噬菌體感染特點。Shuffle T7-K12感受態細胞
經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率大于10 6 cfu/μg。
基因型：
F′ lac, pro, lacIq /△(ara-leu)7697 araD139 fhuA2 lacZ::T7 gene1△(phoA) PvuII phoR ahpC* galE (or U) galK
λatt::pNEB3-r1-cDsbC (Spec R , lacIq)△trxB rpsL150(StrR )△gor△(malF)3
菌株抗性：對氨芐，，和四環素敏感，對和有抗性。
質粒轉化步驟：
1. 將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入質粒 DNA 到細胞中，用手指管底，輕輕
混勻；
2. 冰水浴中放置 30 分鐘，不要晃動；
3. 42℃熱擊 60 秒鐘，不要晃動；
4. 冰水浴中放置 2 分鐘，不要晃動；
5. 加入 500μl 無菌的 SOC 或 LB 培養基；
6. 置于 30℃搖床中，150-200rpm，復蘇培養 60 分鐘；
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板 30℃培養 12-24 小時。
（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μl 吸
頭輕輕吹打散菌塊，取 10μl 重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的
液體來回劃線。這個方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）
（質粒快速轉化步驟：將步驟 2 的時間縮短到 5 分鐘，對于氨芐抗性的質粒，步驟 4 完成后，可直接涂
布或劃線于含抗生素的平板上。其它抗性的質粒仍需 40-60 分鐘的復蘇培養。）
蛋白表達步驟：
1. 挑取單菌落，接種到含 5ml 帶抗生素的 LB 培養基中；
2. 30℃，200rpm 震蕩培養細菌至對數生長期（OD600=0.4-0.8）；
3. 加入 IPTG 到終濃度為 0.4mM，30℃誘導 4 小時或 16℃誘導過夜；
4. 誘導完成后，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍染膠法，Western-Blot法或酶活性分析法）
分析菌體裂解物的總蛋白、上清和沉淀組分，明確表達產物的表達狀況（可溶性或不溶性表達）；
5. 重組蛋白大量表達時，可用 10ml 過夜培養物轉接到 1L 培養基中，當培養到 OD600=0.4-0.8 時，加入終
濃度為 0.4mM 的 IPTG，30℃誘導 4 小時或 16℃誘導過夜（不同蛋白表達的條件有所不同，需在
實驗中優化）。


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抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗 1 萬余種，二抗 100 多種；
重組蛋白：多項發明，原核表達系統穩定表達蛋白 1000 余種。


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