BJ5183 大腸桿菌電轉感受態細胞

產品信息：
組成 BC402-01
BJ5183 Electrocompetent cells 20×50μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl
儲存條件：-70℃保存，避免反復凍融。
產品說明：
BJ5183電轉感受態細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。BJ5183為重組腺病毒質粒構建專用菌株，
能夠表達供pAdEasy骨架質粒和pAdEasy穿梭質粒進行同源重組的所有組分。pUC19質粒檢測感受態細胞的轉
化效率大于10 9 cfu/μg。
基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR )
菌株抗性：對氨芐，敏感，有抗性。
操作方法：
1. 電極間距為 0.1cm 的電轉杯（Gene Pulser®/MicroPulser™ electroporation cuvettes）插入碎冰中，壓實冰
面，冰中靜置 5 分鐘，使電轉杯充分降溫。（電轉杯重復使用方法：每次用完后，用大量的自來水沖
洗干凈去掉菌液和 DNA，用蒸餾水洗 3 遍，將其泡在 75%乙醇中 30 分鐘，取出杯子，瀝干液體，放
在超凈臺中，使乙醇充分揮發，蓋上蓋子放干燥地方備用。）
2. 取-70℃保存的感受態細胞插入冰中，待細胞剛化凍后，加入質粒 DNA 或連接產物（洗脫或溶解質粒
的溶液中離子不能太高，或用雙蒸水稀釋，對照 pUC19 可以用無菌水稀釋到 10pg/μl），用手指管
底輕輕混勻，立即插入冰中，在超凈臺中用無菌吸頭將細胞/DNA 混合物快速轉移到電擊杯中，避免產
生氣泡，確保細胞沉到杯底，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3. 啟動電轉儀，設置電擊參數：2.4 kV，200Ω，25 μF（BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用紙巾擦
掉電轉杯外部的水分，將電轉杯放入電轉槽中進行電擊。完成后，將電轉杯插入冰中，加入950μl無抗
生素的SOC或LB培養基，并將液體轉移到原來保留的感受態空管中，37℃，150-250rpm振蕩培養1小時。
4. 取 100-200μl 左右的菌液或稀釋后的菌液，涂布于含相應抗生素的 LB 平板上，倒置放于 37℃培養箱培
養 12-18 小時。
注意事項：
1. 電轉杯必須預冷。
2. 感受態細胞應該在冰水浴中化凍，加入 DNA 后應輕柔混勻，加入 DNA 的體積小于細胞體積的 1/10。
3. 一旦 DNA 加入到細胞中，電擊操作應該立即進行。
4. DNA 應該溶解在水或 TE 中，連接酶的存在會降低轉化效率，必要時需純化連接產物。
5. 電擊時，電轉杯中的氣泡、含高濃度鹽離子的 DNA 或轉化產物會導致電弧現象的發生。
6. 電擊完成后應該立刻加上 LB 或 SOC 等復蘇培養基，每分鐘延遲加入會導致 3 倍轉化效率的降低。
He, T. C., Zhou, S., da Costa, L. T., Yu, J., Kinzler, K. W. et al. (1998) Proc Natl Acad Sci U S A 95(5):2509-14.


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