為確保產品的性能和無憂的操作，使用前請仔細閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術支持或當地的銷售人員（聯系方式見附錄）。

1.產品介紹

    CNBr Focurose 4FF是經過溴化氰活化后含有氰酸酯基團的快流速純化介質，適用于偶聯蛋白質、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物醫藥純化工藝中經過反復的驗證，得到了廣泛的應用。

特點如下：

a.應用廣泛，可適用于偶聯含氨基的生物類大分子。

b.多點偶聯，簡單、靈活、快速、有效，能高效的維持生物分子的生物學活性及穩定性。

c.流速快、產率高、易于放大。

表1：介質性能參數

2.偶聯條件

a.（A液）清洗

取適量的沉降膠（0.83g清洗完成后約為1.0ml），用5倍體積的A液將介質重懸，5min后將溶液抽干。重復此步驟5次。

備注：此步驟用于激活介質，要保證A液的清洗體積要充足、清洗時間固定在0.5h左右（時間太久介質上面的基團會水解）。

b.配基溶液的制備

將要偶聯的生物分子用B液溶解或者將生物分子置換到B液中（生物分子濃度為1-10mg/ml,建議為5mg/ml）。

備注：確保偶聯時的pH和鹽濃度與B液一致。

c.偶聯

將清洗完的介質和準備好的樣品按等比例（體積比）混合，室溫條件下溫和混勻3-4h。確定偶聯成功（通過測定偶聯前后生物分子含量確定偶聯效率）后，將溶液抽干。

備注：偶聯建議在室溫條件下偶聯3-4h。對于不穩定的配基，建議4-8℃偶聯過夜。

d.（C液）清洗

用5倍體積的C液將偶聯后的介質重懸，再將溶液抽干。再重復此步驟3次。

備注：此步驟用于清洗介質中殘留的生物分子，清洗要*。

e.封閉

用5倍體積的C液進行重懸，室溫條件下溫和混勻3-4小時后，將溶液抽干。

備注：此步驟用于封閉介質上面的基團，室溫條件下溫和混勻3-4小時即可。

f.（D液和E液）清洗

用5倍體積的D液將封閉后的介質重懸，5min后將溶液抽干；再用5倍體積的E液將介質重懸，5min后將溶液抽干。重復此步驟3次。

備注：此步驟用于酸堿清洗掉偶聯不夠緊密的生物分子。

g.保存

用5倍體積的純化水將介質重懸后抽干，再用5倍體積的20%乙醇將介質重懸后抽干，最后用20%乙醇浸泡保存。

備注：此步驟用于保存介質，避免微生物生長。

h.溶液配制

A液：0.001MHCl、0.5M NaCl，調節pH 3.0，4-8℃保存（A液使用前要進行預冷處理）。

B液：0.2M NaHCO3、0.5 M NaCl，調節pH 8.3（如果要偶聯的生物分子為IgG時，pH=8.5-9.0），室溫保存。

C液：0.1M Tris-HCl，調節pH 8.3，室溫保存。

D液：0.05M Tris-HCl、0.5M NaCl，調節pH 8.5，室溫保存。

E液：O.05M 甘氨酸、0.5MNaCl，調節pH 3.5，室溫保存。

F液：1.0M NaCl，室溫保存。

3.清洗

    清洗后可以去除一些強結合性物質（例如一些強結合的蛋白、變性蛋白、脂類等），從而達到恢復介質的優良性能（例如載量、流動性、柱效等）。

    建議每使用5次后進行一次清洗，具體清洗頻率需根據純化的初始樣品的潔凈度進行調整。

⑴常規清洗

a.用5-10倍柱體積的純化水沖洗。

b.用5-10倍柱體積的D液沖洗。

c.用5-10倍柱體積的E液沖洗。

d.用5-10倍柱體積的F液沖洗。

e.用5-10倍柱體積的純化水沖洗。

f.用5-10倍柱體積的20%乙醇沖洗后保存。

⑵劇烈清洗

a.用2-5倍柱體積0.2%非離子型去污劑沖洗后，立即用5-10倍柱體積純化水沖洗。

b.用2-5倍柱體積6M鹽酸胍沖洗后，立即用5-10倍柱體積純化水沖洗。

c.用5-10倍柱體積的20%乙醇沖洗后保存。

備注：劇烈清洗條件是否適用主要取決于偶聯的生物分子的穩定性，采用此條件清洗前，建議先做一個小規模的預實驗驗證生物分子的穩定性。

4.應用案例

案例一

案例二

5.常見問題

表2：常見問題及解決方案

6.訂購信息

表3：訂購信息表

備注：大規格包裝產品或其它產品購買，請咨詢本公司當地銷售或售前技術支持。