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一、細胞基本屬性
細胞名稱:BALB/3T3 clone A31（小鼠胚胎成纖維細胞）
細胞別稱:BALB/3T3 clone A31; BALB/c 3T3 clone A31; Balb/c3T3; Balb/c 3T3; BALB/3T3; Balb/3T3-4-Cl31; 3T3 clone A31; BALB/3T3 cl.A31; BALB3T3 clone A31; BALB/3T3(clone A31); B/C3T3;3T3-A31; 3T3(A31)
細胞貨號:SNL-024
細胞種屬:小鼠
生長情況:貼壁
培養條件:H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
培養環境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養操作
換液周期:2-3天
培養基體積:T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法:
1.盡量吸干凈T25瓶原培養基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養瓶放入37度培養箱消化；
5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養基終止胰酶消化；
6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的*培養基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養瓶里；
8.補足*培養基，將培養瓶放回培養箱靜置培養；
注意事項:不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。
三、細胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規格:200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法:
1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存
注意事項:凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案
Tips：
1.細胞貼壁較弱，消化時間偏短，注意控制消化時間；
2.注意控制細胞密度，過高或者過低都可能影響細胞狀態，不要長時間高密度培養；
我們推薦使用尚恩生物BALB/3T3 clone A31（小鼠胚胎成纖維細胞）*培養基（產品貨號：SNLM-024）作為體外培養的培養基。
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