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一、細胞基本屬性
細胞名稱:KATO III(人胃癌細胞)
細胞別稱:KATO III; Kato Ill; Kato-ll; KATO-II; KATOIl; Katolll; KATO 3; JTC-28; Japanese Tissue Culture-28
細胞貨號:SNL-105
細胞種屬:人
生長情況:半貼壁
培養條件:1640+10%FBS+1%雙抗
培養環境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養操作
換液周期;2-3天
培養基體積:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定)
傳代方法:
1.輕輕吸走培養上清,留2-3ml培養基輕輕吹打細胞面吹下細胞;
2.混勻細胞,收集細胞培養基,900rpm離心3-5min,棄上清;
3.加新的*培養基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養瓶里;
4.補足*培養基,將培養瓶放回培養箱靜置培養;
注意事項:半貼壁細胞會附著瓶底,但貼壁不緊,輕輕吸取培養基輕輕吹打細胞面就會脫落,不需要胰酶消化。建議使用培養皿培養,更適合吹打細胞操作,吹打細胞注意盡量輕柔,不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。
三、細胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規格:200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法:
1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞;
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管;
3.將凍存管轉入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,第二天轉入液氮保存
注意事項:凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案
Tips:
1.細胞半貼壁圓形生長,大量懸浮圓形,傳代時均可收集培養,換液時將懸浮細胞離心收集后重新接回原瓶;
2.傳代有部分細胞碎片可以換液后用PBS潤洗細胞清除,使用的PBS需要恢復到室溫,加入時不要沖到細胞面,潤洗盡量輕柔;
3.該細胞生長極慢,比較容易死亡,不建議沒有相關細胞操作經驗的客戶單獨培養該細胞;
我們推薦使用尚恩生物KATO III(人胃癌細胞)*培養基(產品貨號:SNLM-105)作為體外培養的培養基。