培養箱里,我們的“小勞模"細胞們每天忙著分裂增殖,為我們的實驗貢獻著力量。然而,有時候,這些小家伙們卻會突然“罷工",傳代后的增殖速度變得慢如蝸牛,仿佛一夜之間愛上了慢生活。這背后究竟是什么原因呢?怎樣才能讓細胞們恢復干勁呢? 請看下文:
接種密度低
你知道嗎?很多細胞都有密度依賴。細胞自身會分泌一些因子到培養基中促進周圍的細胞生長(旁分泌)。細胞密度太低,這種化學信號的傳遞減弱,細胞狀態受到影響。接種密度越低,增殖越慢,甚至不增殖。
解決方案:根據細胞生長速度確定合適的傳代比例和接種密度。如果細胞已經傳稀了,可以耐心繼續培養,或將細胞重新傳到更小的器皿中,增加密度。特別提醒!T25培養瓶底面積為25cm2,10cm培養皿底面積是55cm2,所以一個T25傳兩個10cm皿約等于1:4傳代,而不是1:2
培養基、血清不合適
想象一下,你突然來到一個全新的城市上學上班,面對全新的環境,是不是也需要適應一段時間呢?細胞突然被換到新的培養基和血清中,也會出現水土不服的情況,特別是對血清要求高的細胞。新的培養基或血清不對細胞胃口時,導致它們“食欲不振",生長速度自然就慢了下來。
解決方案:
檢查新培養基和原培養基的配方是否有差異,是否需要額外添加試劑,成分盡量保持一致。新培養基和原培養基混合培養1-2代,讓細胞慢慢適應,如果細胞正常生長,再完quan替換為新的培養基。如果它們實在適應不了新培養基,還是換回原培養基,畢竟實驗不等人啊!另外,記得定期換液,別等培養基都變成金黃色了才換,這無異于把細胞活活餓死!
細胞受損
在細胞傳代的過程中,如果發生一些“工傷"事故,比如胰酶消化時間過長,導致它們受傷;消化時間過短,細胞們還沒完quan分開,就被強行“搬家"了,導致細胞膜受損;重懸時瘋kuang吹打,生怕吹不均勻,結果把細胞打得半死不活,都會導致細胞增殖速度變慢。
解決方案:
傳代時嚴格控制胰酶消化時間,控制吹打次數和力道。如果細胞已經受損了,傳代后漂浮細胞和碎片很多,可以嘗試提高血清濃度(總量不超過20%),幫助它們恢復元氣。如果傷情嚴重,搶救失敗,那還是重新復蘇吧!
細胞衰老
原代細胞以及一些有限傳代的細胞系,隨著傳代次數增多,細胞生長速度逐漸減慢,最終停止增殖。
解決方案:
細胞衰老是自然法則無法避免,但我們可以通過優化培養條件和操作,讓細胞盡可能保持好的狀態,并及時進行實驗。對于有限細胞系,要記得凍存早期代次作為備份。對于原代細胞,則要規范提取步驟,保證細胞質量穩定,實驗重復性才能更好。
雖然細胞不增殖的時候我們心急如焚,但也讓我們更加深入了解自己細胞的特性。通過不斷探索和實踐,當我們找到了z適合的培養方案,細胞們會更加健康、快樂地生長著。祝各位同學和自己的細胞們相處愉快!
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