化工儀器網
詳細介紹
產品簡介
本品為使用大腸桿菌 DH5α 菌株制備的高效化學感受態細胞，轉化效率可達 108 cfu/μg DNA，被廣
泛用于質粒轉化、基因克隆等；可以使用藍白斑篩選。
產品組成
組分
DH5α 感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型： F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF) U169 recA1 endA1 hsdR17(rk- , mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96
relA1 λ-
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
產品特性
-該菌株的重組率較低，故常用于克隆質粒的保存；
-藍白斑篩選時，需在平板上預先涂布 IPTG 和 X-gal；
-屬于 E. coli K12 系列，可用于基因克隆等；不可用于以 T7 RNA 聚合酶為表達系統的蛋白表達。
質量控制
無外源質粒 DNA 殘留；
化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90 s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入900 μL LB或SOC培養基（室溫或37 ℃預熱），然后置于37 ℃搖床復壯45 min；
5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用；
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優良轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
化工儀器網