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詳細介紹
產(chǎn)品簡介
EPI400 來源于 EC100 菌株，將 EC100 核基因中控制質(zhì)粒拷貝數(shù)的 pcnB 基因改造成誘導型啟動子驅(qū)
動后獲得了 EPI400 菌株。EPI400 菌株可以顯著降低大部分質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種含不穩(wěn)
定 DNA 的質(zhì)粒或含有毒性基因的克隆；在加入 CopyMore 400 誘導劑后可將質(zhì)粒的拷貝數(shù)提高至正
常狀態(tài)。mcrA 突變和 mrr-hsdRMS-mcrBC 缺失的基因型使得 EPI400 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧
啶或甲基腺嘌呤的 DNA 。recA1和 endA1突變有利于插入 DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA的提取。
lacZΔM15 標記的存在使 EPI400 可用于藍白斑篩選，tonA 突變賦予其抗噬菌體 T1 和 T5 的能力，
rpsL 突變賦予其鏈m素抗性。經(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測，EPI400 感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率可達 107
cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
EPI 化學感受態(tài)細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL
(StrR) nupG trfA tonA pcnB dhfr
存儲條件
-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留
化學法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預熱），后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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