產(chǎn)品簡(jiǎn)介
INVαF′大腸桿菌允許高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制；該菌株帶有 lacZ?M15突變，可以進(jìn)行藍(lán)/白篩選實(shí)驗(yàn)；
該菌株同時(shí)帶有 recA 和 endA1 突變，可顯著降低質(zhì)粒的重組效率以及胞內(nèi)核酸酶的含量，從而提
高質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)量。此外，該菌株還可以利用攜帶 F1 復(fù)制起點(diǎn)的載體來(lái)生產(chǎn) ssDNA。值得注意
的是，在進(jìn)行藍(lán)白斑實(shí)驗(yàn)時(shí)，無(wú)需添加 IPTG 誘導(dǎo)，只需要在平板上涂上 X-gal 即可。INVαF′感受
態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
INVαF′感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型：F′ endA1 recA1 hsdR17 (rK– , mK+) supE44 thi-1 gyrA96 relA1 φ80 lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)
U169 λ–
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；
4. 為確保優(yōu)良轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔
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