詳細介紹
產品簡介
JM108 來源于 JM106 菌株,最初是作為黏粒文庫的宿主被改造而成。 JM108 菌株缺失核酸內切酶
(endA),提高了質粒 DNA的產量和質量;重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率,保證
了插入 DNA 的穩定性。JM108 菌株最大的特點是擴繁質粒產量大,純度高,且質量穩定,特別是
超螺旋質粒比例較高,超螺旋質粒所占比例一般>90%(gyrA96 突變型說明 JM108 菌株的 DNA
gyrase 基因被突變,導致拓撲異構酶Ⅱ的功能受影響,增加了超螺旋質粒的比例),非常適合后續
的動物細胞轉染實驗(超螺旋質粒可提高細胞轉染的效率)。此外該菌株具有萘啶酮酸抗性。吐
露港生物開發的 JM108 感受態細胞經特殊工藝制作,pUC18 質粒檢測轉化效率 108 cfu/μg DNA。
產品組成
組分
JM108 感受態細胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:FendA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 Δ(lac-proAB) hsdR17 (rK- mK+)
存儲條件
-80 ℃保存;請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質量控制
無外源質粒 DNA 殘留;
化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養基(室溫或 37 ℃預熱),然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min;
5. 取不同體積的轉化產物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養箱培養過夜。
注意事項
1. 感受態細胞冰水浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10;
3. 加入待轉化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態細胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保優良轉化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。