GB05-dir 化轉克隆感受態產品簡介
GB05-dir 細胞含有一個突變的 trfA 基因，該基因表達出的蛋白產物可以促進含有 oriV 復制子的質粒的高拷
貝擴繁，誘導劑Ⅰ可以誘導 trfA 基因的表達。當含有 oriV 復制子質粒的 EPI300 細胞在 LB/2YT 或 SOB 培
養基中生長時，trfA 基因的表達被抑制，oriV 復制子質粒的拷貝數維持在很低的水平；當在培養基

產品簡介

GB05-dir化轉克隆感受態

GB05-dir 細胞含有一個突變的 trfA 基因，該基因表達出的蛋白產物可以促進含有 oriV 復制子的質粒的高拷

貝擴繁，誘導劑Ⅰ可以誘導 trfA 基因的表達。當含有 oriV 復制子質粒的 EPI300 細胞在 LB/2YT 或 SOB 培

養基中生長時，trfA 基因的表達被抑制，oriV 復制子質粒的拷貝數維持在很低的水平；當在培養基中加入

CopyMore 300 誘導劑時，oriV 復制子質粒的拷貝數可維持在很高的水平，提高了質粒產量。因此，

GB05-dir 菌株可以降低 oriV 復制子質粒的拷貝數，特別適合于各種不穩定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr

hsdRMS-mcrBC]基因型使 EPI300 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA（例如：哺乳動物

基因組 DNA）。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。lacZΔM15 標

記的

細胞的轉化效率可達 108 cfu/μg DNA。

GB05-dir化轉克隆感受態

產品組成

組分

 

EPI400

化學感受態細胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galK λ– rpsL nupG

trfA dhfr

存儲條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

GB05-dir化轉克隆感受態

質量控制

無外源質粒 DNA 殘留；

化學法轉化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 將感受態細胞從-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 將待轉化 DNA 加入到 100 μL 感受態細胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；

3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動，熱激 90 s 后，立刻置于冰浴中靜置 2-3 min；

4. 向離心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培養基（室溫或 37 ℃預熱），然后置于 37 ℃搖床復壯 45 min；

5. 取不同體積的轉化產物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養箱培養過夜。

注意事項

1. 感受態細胞冰浴中解凍后應立即使用；

2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態細胞體積的 1/10；

3. 加入待轉化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態細胞，僅用手指輕彈即可；

4. 為確保.高轉化效率，整個操作過程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。