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產品名稱：大鼠肌源性干細胞

組織來源：肌肉組織

產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態最佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞簡介：

大鼠肌源性干分離自肌肉組織；肌源性干細胞（MDSCs）屬于成體多能干細胞，具有多細胞系分化和自我更新能力。通過誘導刺激，MDSCs可以分化為脂肪、骨骼、軟骨、平滑肌和神經細胞等多種細胞和組織類型；作為基因治療和組織工程的供體細胞，已成為治療心肌梗死、Duchenne氏肌營養不良等疾病的研究熱點；近年來，肌源性干細胞在治療尿失禁等方面的應用逐步得到重視。需注意的是，肌源性干細胞主要存在于骨骼肌組織中，只是成熟組織的很少部分細胞；平時處于靜止狀態，在細胞應激和組織缺失時才會激活；并且隨著年齡的增加，所含細胞數量逐漸減少，而目前臨床疾病的治療主要是針對成體進行。肌源性干細胞的體外擴增對細胞移植和干細胞介導的基因治療至關重要。對肌源性干細胞的擴增研究發現，EGF、FGF-2和SCF可以通過減數分裂或促使不分裂細胞進入有絲分裂周期，從而刺激細胞增生。更重要的是，細胞因子誘導的體外擴增可以通過自我更新不刺激細胞分化，從而保持干細胞表型。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠肌源性干采用膠原酶--聯合消化法結合密度梯度離心、差速貼壁法，最后通過肌源性干細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠肌源性干經Sca-1免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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