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產品名稱：兔三叉神經星形膠質細胞

組織來源：腦

產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：梭形、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔三叉神經星形膠質體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

細胞簡介：

兔三叉神經星形膠質分離自三叉神經組織；三叉神經為粗大的混合性腦神經，含一般軀體感覺和特殊內臟運動兩種纖維。其特殊內臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經運動核，纖維組成三叉神經運動根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦，位于感覺根下內側，后進入三叉神經第3支下頜神經中，經卵圓孔出顱，隨下頜神經分支分布于咀嚼肌等。運動根內還含有三叉神經中腦核有關的纖維，主要傳導咀嚼肌的本體感覺。三叉神經內以軀體感覺神經纖維為主，這些纖維的細胞體位于三叉神經節（半月節）內，該神經節位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經壓跡處，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。神經膠質細胞是神經組織中除神經元以外的另一大類細胞，也有突起，但無樹突和軸突之分，廣泛分布于中樞和周圍神經系統。在哺乳類動物中，神經膠質細胞與神經元的細胞數量比例約為10：1。在中樞神經系統（CNS）中的神經膠質細胞主要有星形膠質細胞、少突膠質細胞（與前者合稱為大膠質細胞）和小膠質細胞等。傳統認為膠質細胞屬于結締組織，其作用僅是連接和支持各種神經成分，其實神經膠質還起著分配營養物質、參與修復和吞噬的作用，在形態、化學特征和胚胎起源上都不同于普通結締組織。星形膠質前體細胞主要表達Vimentin，而成熟之后表達Vimentin和膠質纖維酸性蛋白（GFAP），故GFAP被認為是星形膠質細胞成熟的標志物。

方法簡介：

實驗室分離的兔三叉神經星形膠質采用消化法結合差速貼壁法篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的兔三叉神經星形膠質經GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續服務依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。

3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態（所拍照片將作為后續服務依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養瓶內培養基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養瓶內培養，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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