詳細介紹
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點:
1.產品僅用于科研即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經過優化,特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果。
產品名稱 | |
英文名稱 | Brucella ovis |
貨號 | CP934000 |
產品特征:
綿羊布魯氏菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴增 。
重復性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,產品僅用于科研使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是綿羊布魯氏菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關產品:
鹽酸他克林標準品人血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA Kit,48T/96T
他克莫司標準品小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA Kit,48T/96T
他克莫司相關物質A標準品大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA Kit,48T/96T
他克莫司系統適用性混合物對照品標準品人硫酸角質素(KS)ELISA Kit,48T/96T
西力士標準品人抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA Kit,48T/96T
塔格糖標準品小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA Kit,48T/96T
他布比妥標準品大鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA Kit,48T/96T
鹽酸坦索羅辛標準品人生長抑素(SS)ELISA Kit,48T/96T
鹽酸坦索羅辛外消旋化合物標準品小鼠生長抑素(SS)ELISA Kit,48T/96T
消旋蛋氨酸標準品豬生長抑素(SS)ELISA Kit,48T/96T
枸櫞酸他莫昔芬標準品大鼠生長抑素(SS)ELISA Kit,48T/96T
綿羊布魯氏菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒單寧酸標準品人基化酶(Methylase)ELISA Kit,48T/96T
左旋酒石酸標準品小鼠基化酶(Methylase)ELISA Kit,48T/96T
牛磺酸標準品大鼠基化酶(Methylase)ELISA Kit,48T/96T
他唑巴坦酸標準品人細胞色素C(Cyt-C)ELISA Kit,48T/96T CD54/ICAM-1 細胞間粘附分子-1抗體磺胺嘧啶
CD54/ICAM-1 細胞間粘附分子-1抗體炔諾孕酮
CD54/ICAM-1 細胞間粘附分子-1抗體萘醌
CD54/ICAM-1 細胞間粘附分子-1抗體巰咪唑
CD54/ICAM-1 細胞間粘附分子1抗體氧芐啶
CD5 CD5抗體己酸羥孕酮
CD48/SLAMF2 CD48抗體己烯雌酚
CD47/MER6 整合素相關蛋白CD47枸櫞酸米芬
CD46/MCP (human) 膜輔蛋白抗體(人)磺酸雙麥角堿
CD46/MCP 膜輔蛋白抗體克霉唑
CD45RO CD45RO抗體鄰苯磺酰胺
CD45/B220 白細胞共同抗原抗體6-巰基嘌呤
CD45/B220 白細胞共同抗原抗體利血平
CD45/B220 白細胞共同抗原抗體2--4-硝基苯胺
CD45/B220 白細胞共同抗原抗體普噻噸