詳細介紹
產品特征:
靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量。
特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴增 。
重復性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少。
擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,效率高。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。產品僅用于科研
產品名稱 | |
英文名稱 | Babesia bigemina |
貨號 | CP933920 |
雙芽巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
檢測方法:
1.Ⅰ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,產品僅用于科研報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器(2 µL、20µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經過優化,特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果。
以下是雙芽巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關產品:
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羥基洋地黃甙標準品小鼠心肌營養素1(CT-1)ELISA Kit,48T/96T ERN2 內質網核信號轉導蛋白2抗體富馬酸福莫特羅
ERM/Etv5 轉錄因子Ets差異基因5抗體鹽酸吡格列酮
雙芽巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒ERK4 細胞外信號調節激酶4抗體洛索洛芬鈉
ERK2/MAPK1 絲裂原活化蛋白激酶1抗體奈韋拉平
ERK1/MAPK3 絲裂原活化蛋白激酶3抗體碘普羅胺
ERK1/2(p44/42 MAPK) 絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體氨三醇
ERG25 基固醇羥化酶單加氧酶1抗體鹽酸替扎尼定
ERdj5/DNAJC10 Erdj5/DNAJC10蛋白抗體鹽酸替羅非班
ERCC6L 發育相關蛋白ERCC6L抗體(醇致畸因子)鹽酸莫索尼定
ERCC1 DNA切除修復蛋白1抗體消旋鹽酸替羅非班
ER-beta 雌激素受體β 抗體鹽酸哌維林
ErbB-3/HER3 表皮生長因子受體3抗體鹽酸多奈哌齊
ERAS/HRAS2 胚胎干細胞RAS蛋白抗體纈沙坦
ER-alpha/beta 雌激素受體α/β抗體鹽酸安普樂定
ER-Alpha 雌激素受體α抗體(用于western blot)阿可樂定