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流式鈣離子濃度檢測技術服務1、鈣熒光探針負載;取細胞懸液,加Fluo-3-Am至10umol/L,置二氧化碳培養箱中孵育1h,其間輕微振蕩3次。離心,去掉多余的染料,再用無鈣緩沖液反復洗滌3次,最后用無鈣緩沖液稀釋。
2、隨機測定每管細胞懸液樣品(以下簡稱樣品)的單個細胞的熒光強度,記為F值,
3、加入10%TritonX100,(破膜用):加入1mmol兒氯化鈣,吹打均勻,解育1~10min.測定熒光即Fmax佰
4、加入EDTA,20ul(鈣鰲合劑),孵育1~10min,激發波長488nm測定熒光.即Fmin值,加0.1%friton是增加膜通透性使細胞外Ca2+進入細胞內,作為最大值。加EGTA是為了螯合Ca2+,作為最小值生理環境中細胞內鈣離子濃度遠低干細胞外液(大約1:10000),細胞膜對鈣的通透性變化對細胞內鈣影響很大流式細胞術是一種高靈敏度的自動分析細胞的高新技術,快速而大量地檢測單個細胞是它的一大特點,用流式細胞術可以擯棄原子吸收光譜法測定組織鈣不能區別細胞內外Ca2+含最之不足,也不似其他方法操作過干繁雜,由干流式細胞術一次測量細胞數量大,故測定結果較為準確,誤差小。更由于在活的細胞中進行測定,極有助于生命科學中Ca2+的研究,
流式鈣離子濃度檢測技術服務
我們擁有專業的實驗室、精良的實驗設備和經驗豐富的科研技術人員。技術團隊包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學、轉錄組學、蛋白質組學、代謝組學、生物化學、病理檢測、基因檢測等技術在科研中的應用與推廣。通過高度細分、較好的的服務平臺,為廣大客戶提供了完善的技術解決方案和服務。目前,及,涉及臨床醫學、腫瘤生物學、免疫學、細胞生物學、分子生物學等生命科學、醫學等諸多領域。
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