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一、培養(yǎng)基用途：

 以HB0277硝酸鹽肉湯為例，該培養(yǎng)基用于蠟樣芽孢桿菌的硝酸鹽還原試驗。

二、培養(yǎng)基成分及使用方法：

1. 培養(yǎng)基成分

2.使用方法

 稱取本品9.0g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，分裝試管，每管5mL（觀察產(chǎn)氣需加小倒管），121℃高壓滅菌15min。

 此培養(yǎng)基需配套HB8282硝酸鹽還原試劑使用。

三、原理：

 蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源、維生素和生長因子；某些細菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽、氨或氮氣。滴加硝酸鹽還原試劑后若試驗菌培養(yǎng)物中有亞硝酸鹽，可與乙酸、對苯氨基苯磺酸和α-萘胺反應生成紅色的N-α-苯胺偶氮苯磺酸。若試驗菌可利用硝酸鹽產(chǎn)亞硝酸鹽進一步轉(zhuǎn)化為氮氣，則小倒管中會有氣體囤積，判定為陽性。若試驗菌可將亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氨，則滴加硝酸鹽還原試劑呈無色反應，此時需加入適量鋅粉證明培養(yǎng)物中是否有未被利用的硝酸鹽存在，若加入鋅粉后為無色則證明無硝酸鹽，則可判斷為陽性。試驗菌不利用硝酸鹽，滴加硝酸鹽還原試劑后為無色，加入鋅粉后變?yōu)榧t色，證明培養(yǎng)物中有未被利用的硝酸鹽被鋅粉還原為亞硝酸鹽產(chǎn)生紅色反應，此時判斷為陰性。

四、實驗結(jié)果：

1、按使用方法制備培養(yǎng)基，接種以下質(zhì)控菌株，在35±1℃需氧培養(yǎng)24±2h。

圖1-2  硝酸鹽還原試驗結(jié)果

a: 大腸埃希氏菌ATCC25922，b: 銅綠假單胞菌ATCC27853，

c:蠟樣芽胞桿菌CMCC63303（培養(yǎng)3d），d: 單增李斯特氏菌ATCC19114

五、注意事項

 由于某些菌利用硝酸鹽緩慢，可延長時間培養(yǎng)，結(jié)果為陽性依然可判定為利用硝酸鹽陽性。