背景知識

酶聯免疫斑點檢測（Enzyme-Linked Immunospot Assay，ELISPOT）可以分解成“酶聯免疫"和“斑點"兩部分。“酶聯免疫"與ELISA中的含義相同，都是指基于酶促放大反應的免疫學檢測。與ELISA一樣，ELISPOT的抗體也是包被于固體載體上，所不同的是：ELISA抗體捕獲的抗原來自樣品溶液中已經存在的、均勻分布的抗原分子，而ELISAPOT抗體捕獲的抗原來自樣品細胞在檢測當時新鮮分泌的抗原分子；ELISA顯示出來的是或深或淺的有色溶液，而ELISAPOT顯示出來的是沉積在固體基板上或多或少的有色斑點。

隨著酶聯免疫分析技術在醫學及生物學領域的廣泛應用, 使體外檢測各種細胞因子及抗體研究有了新的突破。在研究免疫應答機制時以往常用用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測體液中游離的細胞因子（CK）或抗體，但由于游離的循環抗體或 CK 的半哀期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結合，而不能確切的反映體內的抗體及CK 的水平。80 年代，國外的科研工作者根據 ELISA 技術的基本原理，建立了體外檢測特異性抗體分泌細胞和 CK 分泌細胞的固相酶聯免疫斑點技術（ELISPOT）。因其具有較高的特異性和敏感性，目前正被國內外廣泛應用，對探索自身免疫系統疾病發病機制具有重要意義。

應用范圍：

德國BIOSYS公司產品，該EliSpot Reader是針對35-100mm培養碟、載片、6-384孔多孔板和微量培養板的自動檢測和分析儀器。適用于目前實驗室常用的各種培養板上酶聯斑點(Elispot)、病毒斑（ Viral Plaque）、克隆形成（CFU）、腫瘤細胞集落形成（HTCFA）,干細胞集落形成試驗等實驗結果的分析。

Elispot，SARS COV2測定，抗病毒，藥物，氟蟲，細胞/活/死/凋亡細胞，轉染，MCMV和HCMV測定，HEK 293測定，FOCI測定，中和測定，馬立克氏病病毒，類器官，轉基因測定，菌落的細胞感染測定 計數，抗生素效力，腺病毒。

For Elispot, SARS COV2 Assay, cell infection assay antiviral, drug, flourospot, live/dead/apoptotic cell, transfection, MCMV and HCMV assay, HEK 293 assay, FOCI assay, neutralisation assay, Marek's disease virus, organoids, transgene assay, colony counting, antibiotic potency, adenovirus

德國biosys公司介紹

德國biosys由化學家兼工程師Werner Freber創建于1986年，專注于 EliSpot酶聯免疫斑點計數和定量自動化檢測分析設備30多年，biosys公司的立體3D雙光照明（增強斑點與背景的對比度，有效抑制板孔側壁反光造成的“幻影現象”，提高檢測度），能進行單斑點、每孔光密度測定以定量細胞因子分泌的照明系統，解決了ELISPOT斑點計數的快速化，標準化和斑點信息的詳細化，并且可以對細胞因子進行定量分析，是能進行單斑點、每孔光密度測定以定量細胞因子分泌的照明系統，獲得應用于ELISPOT斑點識別的3D雙光源技術，*實現對ELISPOT膜板和ELISPOT透明板的良好識別，采用改進機械結構的前置式載物臺和自動開關密閉檢測室，同一孔中同時識別多至12色ELISPOT斑點，*實現熒光ELISPOT檢測，歐盟科技項目：Eureka Project 2956（多種細胞因子分析儀）儀器。

biosys的bioreader（bioreader 7000系列）和 biocount（biocount6000系列）已成為Elispot酶聯免疫斑點檢測分析的金標準。

ELISPOT技術解決方案提供商。biosys 的產品包括 ELISPOT 分析儀硬件、分析軟件、試劑和標準樣等。CTL擁有自己的，符合GLP規范的高通量ELISPOT實驗室，是世界上能提供全套 ELISPOT 服務，包括 ELISPOT 的質量控制、標準化、臨床應用和技術服務、E L I S P O T技術培訓和承擔來自N I H和F D A等部門重大基金的綜合性技術服務提供商。

Biosys酶聯免疫斑點圖像計數和分析產品特點：

●立體3D雙光照明系統：

能進行單斑點、每孔光密度測定以定量細胞因子分泌的照明系統。
● 彩色成像及分析系統：

高分辨率2340×2000 分辨率SONY fire wire真彩數碼成像系統，可進行雙色或三色Elispot實驗結果的檢測。也適用于病毒斑(Viral Plaque)、克隆形成(CFU)、腫瘤細胞集落形成（HTCFA）,干細胞集落形成試驗等。  數據量高達5M 的圖像數據（單孔）﹑雙色以上的圖像分析功能, 一體化HP 20’ 液晶顯示器.
● 高精度X－Y定位載板臺：

采用高精度齒輪步進電機，避免了皮帶輪步進電機的打滑和老化，定位精度<0.01mm。

  高精度微步進電機、齒輪傳動方式、樣品架移動精度< 0.01mm
● 通用性強：

適用各種載玻片、35-100mm培養碟、6 / 12 / 24 / 48 / 96/384孔各型培養板和滴定板。對于實驗室常用的U-Cytech公司、 Mabtech公司、 R&D公司、 Diaclone公司、 Millipore公司、Whatman公司、 Nunc公司等各型實驗室常用ELISPOT KIT（透明板、白色板、PVDF和尼龍膜板）、Greiner等公司的透明培養板、不透明（白色）培養板、以及PVDF膜培養板均適用，檢測Elispot斑點同時可以分析腫瘤細胞的集落、克隆斑、病毒斑的識別。
您可以從任何來源和細胞系（無論是人還是動物）中選擇Elispot分析。

● 自動聚焦：

需進行不同類型培養板的檢測時，無須手動調焦，轉換更為方便。
●高靈敏性，高特異性的優點：

動態“像素周圍識別”，模糊、彌散、過大、過小斑點以及高背景或不規則背景均可檢測。

“自動邊緣識別技術”,“動態背景識別” Bioreader不是采用一個固定的背景平均“洗去”值，對不規則背景有很大意義。
Bioreader自動識別和去除纖維, 還可以調節圖像參數, 不同程度“洗去”背景，讓背景和斑點顏色對比。
●高分辨率：

每孔可檢測多至2000個斑點，直徑>3µm 的斑點即可被有效檢測（通常設定檢測的斑點大小為20-50µm）。

所有Bioreader型號均配備5 MPixel相機，Bioreader-F-z-i可使用集成的顯微變焦鏡頭提供多達200倍的放大倍率。如果用戶需要更多印版格式并正在尋找便宜的變焦效果，則可選更多像素的相機，可以升級光學組件和攝像頭
●邊沿識別系統：

尤其針對透明板、白色PVDF板，可有效識別板孔邊緣，保證整個板孔的計數。
●光密度值測定：

應用ELISA透光測量原理，可對每個斑點，每個孔進行光密度值測定，定量分析細胞因子分泌。
●*的WASH OUT背景補償功能：

對于背景重的培養板孔可進行自動背景補償調節。
●測量結果可信：

已經過MABTECH, U-Cytech, Diaclone, Pharmingen, R&D等公司ELISPOT產品的驗證，測量結果可信度高。
●用戶自定義參數和再分析：

用戶可根據試驗情況設置斑點識別參數，直接重新分析已掃描數據，不必重復掃描。相同參數下分析結果可重復性為+/-*。
●“One－Click”測量區域選擇：

直觀的板孔選擇界面，可輕松進行單孔、任意孔區域、全板掃描。
●智控分析方式：

用戶可手動選擇需去除的斑點，自定義需去除的破損區域或無法識別區域，測量結果更可信。
●數據分析全面：

包括培養孔原始數據如每孔斑點數、斑點幾何形狀（直徑、圓度、曲率、毛糙度）參數、每個斑點坐標、光密度（提示細胞因子量）等以及樣本均數、方差、統計學分布等多種統計數據和分析圖表。
●直接輸出模式：

可將整板圖像，單孔圖像，每孔斑點數，斑點詳細數據、分布、和統計學分析結果直接輸出到Word、Excel、Powerpoint。可選擇HTML, BMP, JPEG, PDF等多種格式。
●檢測快速：超高精度掃描每個培養板約需12-15分鐘；快速掃描每個培養板約需6-8分鐘 。
● 歐盟CE認證、符合21 CFR PART 11認證要求

●軟件方面
預設試驗分析模式、方便使用；分析參數開放、人機互動更可靠
Bioreader預先設置30多種針對各種板型的分析方法，分析參數開放，用戶還可自定義分析方法，人機互動可分析各種不同情況的Elispot實驗板結果。

●歷史悠久，產品成熟度高、文獻量大：

30多年歷史驗證，1500多個實驗室成功使用，國內有50多的單位成功使用，無技術和應用風險。

相機和光學分辨率

在多孔板上，Bioreader®7000 Fzi micro的大分辨率是多少？

單細胞> 3 µ，聚焦點10-2000 µ或噬菌斑100-5000 µ，細胞克隆50-2000 µ或更多。

BIOSYS使用“真實”光學放大倍數來實現此分辨率

 德國Biosys酶聯免疫斑點圖像計數 總代理

德國Biosys酶聯免疫斑點圖像計數 總代理

Bioreader5000的性能及特點簡介

熒光Elispot
Bioreader 5000系列可以檢測熒光Elispot斑點
Biorader 5000是Elipsot領域商業化能檢測熒光Elipsot斑點的儀器.
這也是Elipsot領域同時檢測3種以上細胞因子的新的應用儀器

圖像處理方面 五大*圖像技術，分辨率更高、斑點圖像更清晰、結果

產品特點：

l       專業的外觀設計

l       一體化HP 20’ 液晶顯示器

l       3D立體圖像照明系統

l       前置載物臺、密閉式檢測室

l       真彩2340×2000 分辨率的索尼公司火線（Firewire）數碼攝像系統

l       數據量高達5M 的圖像數據（單孔）﹑雙色以上的圖像分析功能

l       高精度微步進電機、齒輪傳動方式、樣品架移動精度< 0.01mm

l       五大*圖像技術，分辨率更高、斑點圖像更清晰、結果

l       預設試驗分析模式、方便使用；分析參數開放、人機互動更可靠

l       快速檢測：2-3 分鐘完成96孔板的檢測

l       簡潔的軟件操作界面，規范的文件管理

l       適用6/12/24/96 孔任何品牌/類型的微孔板

l       適用ELISPOT/病毒斑/腫瘤細胞的集落/單克隆抗體的細胞克隆

l       軟件設計符合美國FDA 21 CFR PART 11

l       符合歐盟CE 標準

l       歐盟科技項目：Eureka Project 2956 (多種細胞因子分析儀)