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養殖場用非洲豬瘟檢測試劑盒使用時應該注意什么
養殖場用非洲豬瘟檢測試劑盒使用時應該注意什么？【競道廠家發布】How to use African classical swine fever detection kit for farms 型號：JD-ZWSJ2
試劑盒組成及貯藏條件
名稱20 T50 T
1、吸附柱20個50個
2、收集管20個50個
3、裂解液5 mL11 mL
4、洗液I13 mL32 mL
5,洗液II13 mL32 mL
6.洗脫液1.2 mL3 mL
2、 保存條件及有效期：室溫下保存，有效期12個月.
3、 需自備材料：無水乙醇、1.5 mL無菌離心管、1.5 mL無菌離心管(長臂型)、生理鹽水、研缽、無菌
1mL, 2OOuL、10uL槍頭、記號筆等。
【操作步驟】
一、樣品制備
1、 血液樣品：抗凝血樣品置離心管中，8000轉/分鐘離心2分鐘，取上層血漿;非抗凝血樣品置離心 管中，待凝固后，8000轉/分鐘離心2分鐘，取上層血清，置于滅菌離心管中，編號待檢。
2、 組織樣品：采集脾臟、肝臟、淋巴結、扁桃體等病變組織樣品0.1g.組織勻漿器或研缽中充分勻漿或研磨，加入1 mL生理鹽水混勻，8000轉/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心骨中，編號待檢。
3、 口腔液：進食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉線綁紗布團吸引動物咀嚼，收集口腔液大于 500uL， 8000轉/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心管中，編號待檢。
4、 飼料：取適量研磨后的飼料(約0.2g)，放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP 管屮，振蕩混勻，8000轉/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心管中,編號待檢.
5、 灰塵：用無菌棉簽蘸取適量環境表面上的灰塵，放入含1 mL生理鹽水或PBS(PH為7.4)緩沖液的2 mL EP管中，振蕩混勻，8000轉/分鐘離心2分鐘，取上清于滅菌離心管中，編號待檢。
二、DNA的提取
1、取裂解液200uL加入無核酸酶1.5 mL離心曾屮，分別加入血漿/血清/組織液等樣品液200uL. 震蕩混勻10秒或顛倒混勻10次，室溫放置5分鐘(如果室內溫度較低時.需放置25C水浴溫育)，再加入200uL無水乙醇，顛倒混勻10秒;若樣品渾濁則先12000轉/分鐘離心1分鐘處理，取上清液，以避免堵塞柱子;
2、 將液體轉入套有收集管的吸附柱中， 12000rpm離心1分鐘：
3、 棄收集管液體，向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm離心1分鐘;
4、 棄收集管液體，向吸附柱中加600uL洗液II， 12000 rpm離心I分鐘;
5、 棄收集管液體，12000 rpm離心2分鐘，以*去除殘留洗液;
6、將吸附柱轉入新的無核酸酸1.5mLEP管(長臂型)中，向柱中央滴加50 uL洗脫液，靜置1分鐘, 12000 rpm離心1分鐘，EP管中液體即為病毒DNA。
【注意事項】
1、 實驗前諾仔細閱讀本試劑盒說明書，嚴格按照操作步驟執行.在操作過程中對時間、試劑體積等 粘確控制可以獲得好的結果。
2, 樣本應新鮮采集使用，或低溫運輸儲存;
3, 樣本具有潛在感染風險，核酸的提取應在核酸提取實驗室的生物安全柜中進行。
4、 核酸提取冇關耗材確保高溫滅菌，提取后核酸盡快進入下一步試驗或冷凍保存待用。
5, 試劑使用前應混合均勻，試劑具有一定腐蝕性，使用時請戴手套、口罩做好防護。
6. 低溫下裂解液出現結晶數屬正常現象，可在60°C水浴加熱助溶后使用。
7、 實驗產生的廢棄物應及時收集，遠離PCR實驗室進行無害化處理。
僅供獸醫診斷使用