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溶血性鏈球菌實時熒光檢測系統
溶血性鏈球菌實時熒光檢測系統
Real-time fluorescence detection system for hemolytic streptococcus
2.1產品簡介
溶血性鏈球菌實時熒光檢測系統是指通過熒光染料或熒光標記的 特異性探針,對PCR產物進行標記跟蹤，實時監測反應過程的儀 器。結合相應的軟件可以對產物進行定性和定量分析，計算待測 樣品模板的初始濃度。在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒 光信號積累實時監測整個PCR進程。后通過標準曲線對未知模 板進行定量分析,包括TaqMan熒光探針和SYBR熒光染料。PCR 能對特定基因或物種的豐度進行相對定量，比較不同處理或樣品間 的差異，如基因拷貝數、表達量來硏究基因表達對處理的響應， 同時可以獲得PCR擴增效率等信息.
產品功能
溶血性鏈球菌實時熒光檢測系統是特異性靶基因檢測與定量的一體化平 臺。快速型實時定量PCR儀將PCR熱循環，熒光檢測和各種應用分 析軟件結合在一起,可以動態觀察PCR每一循環各反應管中PCR擴 增產物逐漸增加的情況。PCR實驗結束后可以馬上得到定量結果, 無需凝膠電泳分析，無需純化PCR產物，無需進行任何實驗操作。
2.2試劑介紹
技術特點：
◆準確可靠，臨床雙盲對照試驗>1000例，結果與金標準測序法比對，結果*性大于99%。
◆高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA。
◆快速：整個檢測流程只需3小時。
◆產品僅用于科研簡便：試劑盒提供預混好的試劑，使體系配置操作簡便。
◆防污染
◆高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結合必需* 配對，才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產物配對，在延伸中產生熒光。
產品及特點：
◆ 即開即用，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
◆ 根據伴放線放線桿菌保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
◆ 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
◆ 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續污染。
◆ 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
◆ 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
◆ 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
◆ 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭，下同)。
◆ 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
◆ 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
◆ 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
◆ 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
◆ 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC(樣品制備陽性對照)，一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
◆ 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系，在樣品制備室進行)
◆ 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。
產品主要參數
主要特點：
可檢測固態、液態、表面、膏狀、漿狀樣本;
樣本在檢測時無需任何的前處理過程，直接丟入檢測瓶即可;
可自動控制孵育溫度和孵育時間
檢測樣本只需1ml/1g;同一溫度下可同時檢測8個樣品;
靈敏度高達可檢測到1目標微生物;特異性高達99.999%;
獨立、持續的檢測并記錄瓶中的微生物數量(CFU)
簡單三個操作步驟，傻瓜型，無需專業操作人員;
儀器便攜式，可隨時隨地進行檢測、100%定量分析，并可直接連接電腦出定量分析檢測報告。
RVL微生物檢測瓶
檢測范圍：
活細菌總數
大腸菌群/大腸桿菌/大腸桿菌O157, O111, O104...等
腸道桿菌科
金黃色葡萄球菌
銅綠假單胞菌;綠膿桿菌
沙門氏菌
李斯特菌
腸球菌
酵母菌
應用范圍：
衛生控制：
-食品(HACCP)
-廚房、工具、表面(HACCP)
-水質
-(CDC)疾病控制、進出口檢驗檢疫
-藥品及 化妝品
與我們的生活息息相關，例如：
咖啡館、餐廳
水源檢測、制水廠
分析實驗室和HACCP診斷
農產品及相關加工公司
藥廠、藥房、化妝品廠
環境監測機構
水配送公司
消費者保護團體、工商管理機構
室內空調調節公司
集傳統檢驗方法優點于一身:
-培養皿法
-酶法(β-葡萄糖苷酸酶分析)
-免疫法(抗原搜尋)
-基因法(基因搜尋)
檢驗樣本無需任何前處理
-液態樣本，固態樣本和表面樣本均無需前處理
定性和定量分析
-搭配檢測機：100%的定量分析
-肉眼判讀：定性或半定量分析
簡單便捷
-簡單的三個步驟得到檢測結果
檢驗迅速
-是傳統檢驗方法速度的2～5倍
高靈敏性
-可以檢測到1目標微生物(理論極值)
高特異性
-特異性高達99.999%(理論極值)
檢測瓶就是實驗室
-微生物檢測瓶隨時可用
-未受過嚴格專業訓練的檢測人員也可隨時隨地進行檢測
使用后安全丟棄
-和過期藥物同樣處理
微生物檢測瓶尤其能應用于軍事、大型展會等等的食品快速檢測
(微生物快速檢測)
RVL微生物快速檢測瓶
微生物快速檢測儀RVLM :
-簡單、便捷，100%定量分析
-在同一溫度下可容納8個樣品。
-可自動控制孵育溫度和孵育時間
-獨立、持續的檢測并記錄瓶中的微生物數量(CFU)
使用后無菌處理
-按下RVL微生物檢測瓶的瓶蓋上方
-放心安全丟棄(與過期藥物同樣處理)
若沒有RVLM微生物檢測儀：
-充分溶解混合后，放入恒溫器孵育
(在適當溫度下孵育適當時間，請查上表)
-肉眼判讀定性或半定量分析結果
以大腸菌群為例：
若菌落數>108CFU/ml：2小時內顏色即變成黃色;
若菌落數<102CFU/ml：14小時內顏色不會變成黃色;
若菌落不存在：18小時后顏色仍保持開始顏色
或其他中間色(不變成黃色)
簡單三個步驟得到100%定量檢測結果：
一步：放入樣本
-打開瓶蓋，加入11ml無菌水
-放入液態(固態/表面)樣本0.1~1.0ml(0.1~1.0g)
-蓋緊瓶蓋
第二步：搖動瓶子直到溶劑充分溶解或混合
(充分溶解或混合如右圖所示)
-若使用振蕩器，需時20秒左右;
或用手用力搖，需時2~3分鐘左右。
第三步：在適當時間判讀結果(請查左表)
-使用RVLM微生物檢測儀：
-充分溶解混合后立即放入檢測儀
-得到100%定量分析結果