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基因工程中用到的連接酶主要是大腸桿菌DNA連接酶以及T4 DNA連接酶，目前后者的應用更為廣泛。T4 DNA連接酶屬于DNA連接酶的一種。在載體構建和酶切連接的分子克隆中，可借助T4 DNA連接酶將插入片段連入載體中。T4 DNA連接酶催化雙鏈DNA中鄰近的3′-羥基-和5′-磷酸末端之間形成磷酸二酯鍵。雙鏈DNA中單鏈切口也被T4 DNA連接酶封閉。

T4 DNA 連接酶的功能特點：

連接類型：T4 DNA連接酶具有廣泛的底物特異性，它可以連接雙鏈DNA的粘性末端和平頭末端。此外，它還可以催化雙鏈RNA以及雙鏈RNA與DNA之間的連接，但不能催化單鏈核酸的連接。需要注意的是，雖然T4 DNA連接酶可以連接平末端，但連接效率相對較低。

應用廣泛：在基因工程中，T4 DNA連接酶被廣泛應用于DNA片段的連接、質粒的構建、基因克隆等實驗操作中。