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mNGS及古細菌DNA檢測應用推薦：PCR去污染試劑盒
閱讀：1103 發布時間：2021-7-15描述
在研究和診斷中，PCR是一種檢測DNA是否存在的敏感方法。PCR中使用的聚合酶經常被E.coli DNA污染。當檢測少量細菌DNA時，污染的DNA可能導致靈敏度降低和假陽性。其他污染源可能是dNTPs、緩沖體系、引物/探針，以及操作過程中引入的DNA污染。一般來說，對細菌的檢測和分型采用16S或23S rDNA基因保守區段為靶點的廣譜范圍探針。該方法對細菌DNA污染非常敏感，而大多數Master mix和聚合酶中都發現細菌DNA的痕跡。當使用qPCR檢測或定量少量的細菌DNA時，污染的E.coli DNA可能會導致假陽性結果。
為了解決這個問題，我們開發出PCR去污染試劑盒，既能去除Master mix中細菌DNA污染，又不影響PCR反應的靈敏度。此外，該試劑盒無RNase活性。
優勢
1. 減少背景污染，提高目標基因檢測下限；
2. 不影響PCR檢測靈敏度；
3. 簡單易用，操作方便。
應用 1. 去除PCR及RT-PCR的mastermix中E.coli內源DNA污染及其他DNA污染；
2. 用于終點PCR和探針依賴的qPCR；
3. 用于細菌檢測及基因分型；
4. 用于古細菌DNA檢測。
組分及特性
dsDNase：雙鏈特異性DNA酶，去除Master mix、引物及探針等的污染DNA；
DTT：60℃條件下，能夠不可逆滅活dsDNase，確保模板DNA不被清除。
不降低反應靈敏度 DNA污染是高靈敏度應用面對的主要問題。這些應用，以低豐度DNA為目標檢測基因，極易受到污染DNA的干擾。因此，任何影響PCR靈敏度的去除DNA污染的方法，都是不能使用的。
Figure 2. 用PCR去污染試劑盒處理/未處理的mastermix、5個10倍梯度稀釋的gDNA和水（NTC）為模板進行qPCR檢測。與NTC untreated組相比，NTC decontaminated組在45個cycle仍然沒有信號，說明PCR去污染試劑盒能程度去除mastermix中的污染。PCR去污染試劑盒處理前/后數據相比，Cq值并沒有明顯改變，說明基本不影響反應靈敏度。
訂購信息
ArcticZymes Technologies成立于20世紀80年代后期，總部位于挪威。致力于從海洋生物中識別新的冷適應酶，用于分子研究、體外診斷和治療領域。
上海創凌生物科技有限公司，聚焦細胞治療、基因治療、類器官研究、mNGS病原微生物檢測等領域，是ArcticZymes Technologies的中國代理。