半胱氨酸依賴性過氧化物還原酶 NADH 過氧化物酶時,科學家就意識到需要化學探針來檢測和鑒定蛋白質中氧化的半胱氨酸殘基,尤其是在亞磺酸狀態下。NADH過氧化物酶的自然氧化形式含有半胱氨酸亞磺酸(加上一種氧化的、非共價結合的FAD),但這并不那么容易證明(Poole & Claiborne,1989年,J Biol Chem 264,12330)。
經過研究,科學家開創了使用NBD氯化物作為捕獲劑,能夠區分蛋白質上的硫醇和亞磺酸部分(Ellis & Poole,1997,生物化學36,15013),但這種方法的實用性主要限于只有一種或少量半胱氨酸的純化蛋白質。
為了檢驗亞磺酸形成在生物系統中起的作用比人們認識到的要廣泛得多的假設,科學家想出一種試劑來標記蛋白質中的亞磺酸使用與報告基因組相連的 dimedone 樣試劑。預算科學家們開發了用于生化檢測的第一批試劑(DCP-Bio1 和 DCP-N3)。蛋白質氧化還原調節中半胱氨酸亞磺酸檢測探針DCP-Bio1。
DCP-Bio1 基于二美酮,包含一個生物素標簽,使其與多種技術和分析形式兼容。DCP-Bio1 是一種廣泛使用的、可滲透細胞的生物素標記的 1,3-二羰基探針,對亞磺酸具有選擇性反應性。它對體外和體內次磺酰化蛋白質或肽的親和捕獲非常有用,并且與下游應用兼容,包括 Western blot、蛋白質組學和成像分析。
產品特色:
-包含可切割的生物素標簽
-在 pH 值為 6.0 - 8.0 時與半胱氨酸亞磺酸 (-SOH) 穩定、可重現的結合
-非常適合體外和體內應用
-與 WB、ELISA 和親和分離兼容
工作原理:
蛋白質中氧化還原敏感的半胱氨酸殘基可能作為氧化信號傳導的重要組成部分或氧化應激的傳感器。半胱氨酸亞磺酸修飾是研究細胞內生物信號轉導的人感興趣的新興領域。
蛋白質中半胱氨酸亞磺酸的形成是由于溫和的氧化劑(如過氧化氫、烷基氫過氧化物和過氧亞硝酸鹽)對敏感的半胱氨酸殘基進行氧化修飾。這些次磺酸修飾的蛋白質可以通過它們與 dimedone 形成加合物的能力來鑒定,但該試劑沒有為此類加合物提供光譜或親和標簽,以便以后分析。DCP-Bio1 可用于有效檢測蛋白質氧化還原調節中半胱氨酸亞磺酸的形成,并且在存在生物素標記的情況下,DCP-Bio1 與多種標記后分析和分析形式兼容。
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