化工儀器網
技術文章
固氮酶檢測能夠直接反映固氮微生物的固氮能力
閱讀：2383 發布時間：2022-10-21 在自然界中，固氮微生物可以在固氮酶的作用下，通過生物固氮(以自生固氮、共生固氮或聯合固氮的形式)將大氣中的分子氮轉化為氨，參與氮循環。研究固氮微生物不僅有利于氮肥的合理施用，而且有利于微生物肥料的發展。固氮酶檢測能夠直接反映固氮微生物的固氮能力。
生物固氮是固氮微生物*的生理功能，由固氮酶催化。固氮酶活性的檢測對于生物固氮工程的研究具有重要意義。以乙炔還原法為基礎，為研究人員提供了固氮酶活性、海藻固氮菌、土壤固氮酶活性和固氮酶檢測。
取適量樣品于帶有異丁基橡膠塞的密封瓶中，抽出部分空氣，注入等量的標準乙炔氣體，調節光照時間和溫度進行培養，培養后取密封瓶中的氣體進行檢測。乙烯含量用外標法定量，配置5種不同濃度的乙烯氣體進行檢測。根據濃度和峰面積建立標準曲線，每批樣品都要重新繪制標準曲線。方法采用標準樣品法進行質量控制。每10個樣品用已知濃度的標準乙烯氣體樣品進行測試，同一樣品平行測試5次，計算準確度和精密度，準確度和精密度應在20%以內。
1、檢測原理:乙炔還原法(固氮酶能將乙炔氣還原成乙烯氣)
2、測試平臺:氣相色譜儀-氫火焰離子檢測器(GC-FID)
樣品要求:
1、土樣(≥8.0g/樣；如果待測含水量≥10.0g/個樣品)，用干冰或冰袋運輸。
2、根瘤樣品(≥1.0g/樣品)在液氮中冷凍，在-80℃下儲存，在干冰中運輸。
3、細菌(≥15ml/樣品)，無氮培養基活化，冰袋運輸。
固氮酶檢測實驗方案:
1、稱取約1.0g結節組織，放入20mL空瓶中。用注射器抽取2ml空氣后，用注射器注入2ml乙炔氣體。樣品中乙炔的濃度為10%。
2、將瓶子放在30℃的恒溫水浴中60分鐘，避光。