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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>試劑盒>> 二胺氧化酶(DAO)測試盒

二胺氧化酶(DAO)測試盒
  • 二胺氧化酶(DAO)測試盒
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更新時間:2024-05-06 15:22:57瀏覽次數:424評價

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二胺氧化酶(DAO)測試盒 二胺氧化酶(Diamine Oxidase,DAO)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產品.為客戶全面解決實驗、生產、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務。

二胺氧化酶(DAO)測試盒

微量法100T/48S

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛,其活性與核酸和蛋白合成密切相關,能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。

測定原理:

DAO催化尸胺產生醛和過氧化氫,外源添加過量的辣根過氧化物酶,催化過氧化氫氧化鄰聯茴香胺生成氧化型鄰聯茴香胺,在460nm處有特征吸收峰,通過測定該波長吸光度增加速率,計算DAO活性。

自備實驗用品及儀器:

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體120mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體0.3mL×1支,4℃保存。

試劑二:液體2.5mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體1.2mL×1管,4℃保存。

粗酶液提取:

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

血清等液體:直接測定。

測定操作表:

1、分光光度計/酶標儀預熱30min,調節(jié)波長至460nm,蒸餾水調零。

2、操作表


對照管

測定管

粗酶液(μL)

50

50

提取液(μL)

128

108

試劑一(μL)

2

2

試劑二(μL)

20

20

試劑三(μL)


20

混勻,37℃水浴30min,微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調零,測定460nm吸光值。ΔA=A測定-A對照。

酶活性計算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

(1)按樣本蛋白濃度計算:

酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫克組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位(U)。

DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 18×A460÷Cpr

(2)按樣本質量計算:

酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每克組織每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。

DAO活性(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 18×A460÷W

(3)按細胞數量計算:

酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每104個細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。

DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)÷T= 18×A460÷細胞數量

 

(4) 按液體體積計算

酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫升血清每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。

DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反總÷V樣÷T= 18×A460

ε:氧化型鄰聯茴香胺毫摩爾消光系數:7.5 L/mmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應中樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min

b. 用96孔板測定的計算公式如下

(1)按樣本蛋白濃度計算:

酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫克組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量為一個酶活力單位(U)。

DAO活性(nmol/min/mg prot)= ×V反總÷(V樣×Cpr)÷T= 36×A460÷Cpr

(2)按樣本質量計算:

酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每克組織每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。

DAO活性(nmol/min/g 鮮重)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 36×A460÷W

(3)按細胞數量計算:

酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每104個細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。

DAO活性(nmol/min/104cell)= ×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)÷T= 36×A460÷細胞數量

(4) 按液體體積計算

酶活性定義:在pH7.2,溫度為37℃條件下,每毫升血清每分鐘催化產生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個酶活力單位。

DAO活性(nmol/min/mL)= ×V反總÷V樣÷T= 36×A460

ε:氧化型鄰聯茴香胺毫摩爾消光系數:7.5 L /mmol/cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V反總:反應總體積,0.2mL;V樣:反應中樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min

注意事項:

1、如果OD值小于0.01,適當加大提取用樣本量;OD值大于0.8,粗酶液可適當稀釋,或者減少提取用樣本量。

2、樣品蛋白質含量需要另外測定。

上海牧榮生物科技有限公司

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  6. 質量保證,所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式,為客戶全面解決實驗、生產、開發(fā)需求。公司整合國際與國內資源,加強網絡建設,提高公司內部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務。

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二胺氧化酶(DAO)測試盒





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