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HitHunter® cAMP 檢測試劑盒手冊簡介

閱讀：747 發(fā)布時間：2023-06-30

HitHunter cAMP 檢測小分子試劑盒提供了一種穩(wěn)健、高靈敏度且易于使用的檢測方法，用于根據(jù)細(xì)胞中 3'-5'-環(huán)單磷酸腺苷 (cAMP) 的產(chǎn)生來監(jiān)測 G 蛋白偶聯(lián)受體 (GPCR) 的激活。該試劑盒非常適合篩選和分析小分子。對于測試生物制劑樣品（例如血清或血漿中的粗制生物樣品、純化或未純化的抗體[抗配體或抗受體]以及雜交瘤上清液），我們建議使用專為生物制劑設(shè)計的 HitHunter cAMP Assay for Biologics和大分子應(yīng)用。其他來源的細(xì)胞系也與 HitHunter cAMP 檢測兼容。

技術(shù)原理

配體結(jié)合后的GPCR激活啟動了一系列的第二信使級聯(lián)，從而導(dǎo)致細(xì)胞反應(yīng)。該信號傳導(dǎo)涉及一種被稱為腺苷酸環(huán)化酶的膜結(jié)合酶。Gαs -和Gαi -偶聯(lián)受體分別通過抑制或刺激腺苷酸環(huán)化酶來調(diào)節(jié)cAMP。在HitHunter cAMP實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)GPCRs的細(xì)胞利用GPCR的自然偶聯(lián)狀態(tài)來監(jiān)測Gα的激活s -和Gαi -耦合受體。在配體刺激后，通過使用基于酶片段互補(bǔ)（EFC）技術(shù)的同質(zhì)（無洗滌）、信號獲得競爭性免疫分析法測量細(xì)胞cAMP水平來監(jiān)測GPCR的功能狀態(tài)。

GPCR cAMP路徑

在該實(shí)驗(yàn)中，來自細(xì)胞的cAMP和ED標(biāo)記的cAMP（ED-cAMP）競爭抗cAMP抗體（Ab）結(jié)合位點(diǎn)。抗體結(jié)合的ED-cAMP不能與EA互補(bǔ)，但未結(jié)合的ED-cAMP可以自由地補(bǔ)充EA形成活性酶，隨后產(chǎn)生發(fā)光信號。所產(chǎn)生的信號量與細(xì)胞中cAMP的信號量

成正比。HitHunter cAMP分析EFC技術(shù)使用了一種β-半乳糖苷酶（β-gal）酶，它被分成兩個片段，酶供體（ED）和酶受體（EA）。這些片段獨(dú)立地沒有β -gal活性；然而，在溶液中，它們迅速補(bǔ)充形成一個活性的β -gal酶。HitHunter的cAMP檢測試劑盒提供了一種強(qiáng)大的、高靈敏度的、易于使用的、基于細(xì)胞的功能檢測方法，通過cAMP的產(chǎn)生來研究GPCR的活性。該試劑盒包含了檢測表達(dá)Gα的cAMPHunter™細(xì)胞中cAMP所需的所有試劑s -和Gαi由小分子配體誘導(dǎo)的-偶聯(lián)受體。該柔性檢測系統(tǒng)已被設(shè)計用于96孔和384孔板格式的激動劑或拮抗劑模式。

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