耐堿性蛋白A瓊脂糖凝膠 rat ProteinA Berpharose FF 層析柱
耐堿性蛋白A瓊脂糖凝膠FF

（rat-Protein ABerpharoseFF）

1.產品介紹

同普通蛋白A瓊脂糖凝膠相比，耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF大大提高了凝膠的耐堿性，可以使用0.1-0.5MNaOH溶液去除熱源或對凝膠進行清洗。瓊脂糖凝膠骨架上的延伸碳臂和重組耐堿蛋白A上的定向結合位點的設計保證了兩者之間的定向牢固鍵合以及耐堿蛋白A同抗體間的高效親和能力。

2.規格

1ml（預裝柱）、5ml（預裝柱）、10ml（預裝柱）、25ml、100ml、500ml、1L 純化流程

應用舉例：

結合緩沖液：20mM磷酸緩沖液、150mMNaCl、pH7.0

洗脫緩沖液：0.1M甘氨酸，PH3.0或0.1M檸檬酸緩沖液，pH 4.0

中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

1） 1ml耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF預裝柱用5-10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液。

2）用結合緩沖液平衡5-10個柱床體積。

3）將5ml人多抗血清用結合緩沖液稀釋到50ml，0.45μm濾膜過濾上樣。

4）用結合緩沖液再洗5-10個柱床體積。

5）用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調節其pH至中性。

6）每次使用后依次使用3個柱體積的結合緩沖液，5個柱體積的去離子水，5個柱體積的20%的乙醇平衡保存，防止填料被細菌污染。

7） SDS-PAGE電泳分析。

6.注意事項

1）樣品洗脫后一般pH很低，應立刻用堿性中和緩沖液（如1MTris-HCl，pH8.5）將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5-10%、pH7.5的緩沖液（如1MTris-HCl或1M磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

2）使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內產生氣泡，影響純化效果。

3）填料再生清洗：隨著一些變性物質的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量下降，嚴重影響純化效果，這時需要對填料進行再生清洗（如下步驟）：先用3倍柱體積的結合緩沖液清洗，然后用至少2倍柱體的0.1-0.5 M NaOH清洗，接觸時間為15 min，最后用5倍柱體積的結合液沖洗。（注：因0.1–0.5 M NaOH粘度大易造成壓力增加，可進行反向沖洗。）

4）本產品保存條件：20%乙醇，4-8℃。
耐堿性蛋白A瓊脂糖凝膠 rat ProteinA Berpharose FF 層析柱