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技術文章

基于NanoBRET™TE的細胞內激酶細胞測定服務

閱讀:1137          發布時間:2021-5-31

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用于晶體學的超純蛋白質的定制生產

我們與加拿大公司IniXium Inc.的合作使我們能夠為客戶提供對結構測定和晶體學應用的超純,高質量蛋白質。我們了解準確確定小分子與其靶標的結合狀態以促進高效化合物的發現和優化的重要性。晶體結構分析可以是迅速有效地實現這一目標的強大方法!晶體學研究人員的專業團隊通過定制生產最高等級的蛋白質,使其成為可能。

服務特色

我們的服務首先為您的報價提供報價,包括周轉時間和費用。為便于為結構分析和基于片段的藥物發現提供最佳蛋白質,我們的服務包括在開始實際蛋白質生產之前進行“通過/不通過討論。

審查和討論項目進度,以便在實際生產之前決定是否進行

使用行之有效的技術與經驗豐富的晶體學專業人員聯系

專注于出色的細菌和哺乳動物細胞表達系統

哺乳動物表達優于昆蟲表達的IniXium

時間/成本效益方法

●跳過費力的病毒儲備制備/放大步驟

●迅速放大以達到產量的克數

靶標范圍更廣

●某些蛋白質僅在哺乳動物系統中可行

更接近原生目標

哺乳動物細胞中的糖基化更像天然的

基于NanoBRET™TE的細胞內激酶細胞測定服務

量化激酶抑制劑在自然發生結合的細胞環境中的占有率,選擇性,親和力,對于更準確地預測其對抗人激酶的結合力至關重要。除了平衡評估外,還希望獲得動力學參數(如“停留時間”)以更好地優化化合物。使用NanoBRET™目標參與細胞內激酶測定系統(Promega)進行定量和廣譜激酶分析服務,使您能夠評估化合物在生理條件下對選定細胞內靶標的參與度,包括化合物在靶標上的停留時間,同時保持細胞完整。

提交您感興趣的化合物,Carna將迅速提供蜂窩IC 50 值和停留時間!

研究表達全長激酶的完整細胞中的化合物功能

一種示蹤劑涵蓋了廣泛的激酶研究

在細胞ATP環境下提高了選擇性

[1μM克唑替尼的目標占有率]

(右)使用HEK293中的細胞內激酶

(左)使用在Carna MSAKm ATP生化分析的重組激酶

NanoBRET™系統

通過測量從生物發光蛋白供體(NanoLuc®熒光素酶)到熒光探針(NanoBRET™示蹤劑)的能量轉移,這種基于接近度的測定法可檢測活細胞中的蛋白質相互作用。NanoBRET™TE分析法通過競爭性置換NanoBRET™示蹤劑來測量測試化合物的表觀親和力,該示蹤劑可逆結合至活細胞中表達的NanoLuc®螢光素酶激酶融合蛋白。

將一種可滲透細胞的熒光NanoBRET™示蹤劑(一種BRET受體)添加到表達全長激酶/NanoLuc®融合蛋白的HEK293細胞中。示蹤劑與靶蛋白的結合產生BRET信號

測試化合物與靶蛋白的結合導致靶蛋白與完整細胞內部示蹤劑之間的NanoBRET™信號丟失

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