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技術文章

PCR實驗原理

閱讀:1380          發布時間:2023-7-14

原理:

PCR利用DNA聚合酶的催化作用,在高溫下依次完成DNA的變性、引物結合和DNA合成等反應,從而使DNA序列得到擴增。PCR的核心是引物,其能夠與目標DNA序列的特定區域互補配對,使得DNA聚合酶能夠選擇性地合成引物兩側的DNA分子,從而擴增出目標DNA序列。

 

操作過程:

1. DNA模板的制備:將目標DNA提取出來,使其成為PCR反應的模板。

2. 引物的設計:根據目標DNA的序列設計引物,以便在PCR反應中能夠引導DNA擴增。

3. PCR管中的混合溶液制備:將模板DNA、引物和PCR反應所需的其他試劑加入混合溶液管中,包括四種dNTP(脫氧核苷酸三磷酸)、

4. PCR反應條件的設置:旋轉電風扇調節樣品表面溫度,通透底膜PC管蓋與PC反式培養皿卡合,自動調節樣品超高速溫升和降溫速率,確保PCR反應條件的恒定性。

5. PCR反應的進行:將PCR反應管放入PCR儀中,反應程序根據需要進行多次循環,在每一個循環中,反應管中的溫度會在一定的溫度區間中不斷變化,使引物與目標DNA互補結合,DNA鏈變性,然后DNA聚合酶開始合成新DNA鏈來擴增目標序列,完成DNA擴增和PCR反應。

6. PCR反應產物的檢測和分離:反應結束后,可以通過凝膠電泳等技術檢測PCR反應產物,分離目標DNA擴增產物,進行后續的研究和分析。

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