化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
酶活性測(cè)定常見(jiàn)方法
閱讀：837 發(fā)布時(shí)間：2023-7-12（1）定時(shí)法：（兩點(diǎn)法）
通過(guò)測(cè)定酶反應(yīng)開(kāi)始后某一時(shí)間段內(nèi)（t1到t2）產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來(lái)求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開(kāi)始的時(shí)間。
酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時(shí)間，通過(guò)加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理沉淀劑等，使反應(yīng)停止（也叫中止反應(yīng)法）。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測(cè)出底物和產(chǎn)物的變化。
該法最基本的一點(diǎn)是停止反應(yīng)后才測(cè)定底物或物的變化。
優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單易行，對(duì)試劑要求不高。
缺點(diǎn)：難保證測(cè)定結(jié)果的真實(shí)性。
難以確定反應(yīng)時(shí)間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。隨著保溫時(shí)間的延續(xù)，酶變性失活加速。
（2）連續(xù)監(jiān)測(cè)法：
又稱為動(dòng)力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。
在酶反應(yīng)過(guò)程中，用儀器監(jiān)測(cè)某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時(shí)間的變化所發(fā)生的改變，通過(guò)計(jì)算求出酶反應(yīng)初速度。
連續(xù)監(jiān)測(cè)法根據(jù)連續(xù)測(cè)得的數(shù)據(jù)，可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計(jì)算酶活力。
因此連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定酶活性比定時(shí)法更準(zhǔn)確。
實(shí)際工作中，采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理應(yīng)用、最頻繁測(cè)酶活性濃度的方法。
（3）平衡法：
通過(guò)測(cè)定酶反應(yīng)開(kāi)始至反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)產(chǎn)物或底物濃度總變化量來(lái)求出酶活力的方法，又叫終點(diǎn)法。