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技術文章

閱讀：941 發布時間：2023-4-18

實驗材料

基礎培養基（液體或干粉）；PET/PETG方形試劑瓶；血清（常規為FBS/NBS）；補充劑；移液槍；電動移液槍；15mL、50mL無菌離心管；滅菌超純水；盒裝無菌吸頭；血清移液管；超凈工作臺；雙抗（青鏈霉素混合液）；杯式濾器(0.22μm PES膜)；針式濾器 (0.22μm PES膜)

實驗準備

血清準備：

配置培養基前一天，將所需血清從-20℃冰庫取出，放置入2-8℃冰箱緩慢解凍儲存，使用前37℃水浴加熱。

培養基準備：

液體基礎培養基使用前37℃水浴加熱。

實驗流程

基礎培養基配置（干粉）：

根據配置體積，選擇合適的滅菌后容器，在容器中倒入約90%體積的超純水，將培養基干粉全部倒入該容器中，用少量超純水將袋內殘留粉末洗出。

攪拌30min使所有成分溶解，待溶液澄清后，根據說明書加入適當量的碳酸氫鈉（分析純），繼續攪拌5-10min至溶解，隨后超純水定容并調節PH值。(過濾會使培養基PH值稍微偏高，所以用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調整PH值至7.20-7.30）

使用0.22μm杯式濾器或0.22μm針式濾器過濾除菌，并按照日常使用規格分裝入PET/PETG方形試劑瓶中，2-8℃條件下避光保存備用。

培養基配置：

若含有補充劑，用1000μL無菌吸頭取出適量預熱完成的基礎培養基，注入補充劑西林瓶中，將其充分溶解，再將含有補充劑的培養基轉移入基礎培養基中。

接著按照血清使用比例，用血清移液管吸取適量預熱完成的血清，注入基礎培養基中，蓋上瓶蓋充分混勻。

雙抗加入：

除了特殊篩選系統外，一般正常培養狀態下，培養基中不添加任何抗生素。若為防止細菌、真菌污染，或懷疑細胞污染需要清除細菌，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養基中的終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml。

培養基保存：

將配置后的培養基2-8℃條件下，避光保存備用；或按照使用需求分裝入對應規格的PET/PETG方形試劑瓶中。隔夜或1-2天后觀察培養基，溶液澄清通透且無染菌，方可使用。

使用多余的血清，按照剩余量，可分裝入15mL/50mL的無菌離心管中（防止血清凍存后膨脹泄露問題，離心管工作體積建議為80%），亦可分裝入合適規格的PET/PETG方形試劑瓶中，并用封口膜封口，-20℃條件下避光保存。