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胰蛋白酶的作用有哪些
閱讀：901 發布時間：2022-6-6胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種，EC 3.4.4.4，是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中，作為消化酶而起作用。在胰臟是胰蛋白酶的前體胰蛋白酶原被合成后，作為胰液的成分而分泌，受腸激酶，或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶，是肽鏈內切酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側切斷。它不僅起消化酶的作用，而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體，起活化作用。是特異性強的蛋白酶，在決定蛋白質的氨基酸排列中，它成為*的工具。
胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時，胰酶溶液的作用能力強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。終止消化時，可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。
1. 稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調 PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中。攪拌混勻，置于 4℃ 內過夜。
2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌。
3. 分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用可。
胰蛋白酶-EDTA消化液(Trypsin-EDTA Solution)含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA（0.53mM），溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中，經過濾除菌，可以直接用于培養細胞和組織的消化。本產品具有方便快速、穩定安全、細胞狀態好等特點。
產品說明：
在組織細胞的體外培養和原代細胞培養中的組織細胞分散（將組織塊制備成單個細胞懸液）以及傳代細胞培養中，貼壁生長細胞的消化分散均要使用組織細胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶，EDTA等，其功能主要是使細胞間的蛋白質（如細胞外基質）水解，使組織或貼壁細胞分散成單個細胞，制成細胞懸液用于進一步的實驗。
使用方法：
1. 貼壁細胞的消化：
a) 吸去培養液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
b) 加入少量胰蛋白酶消化液，蓋過細胞即可，室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。
c) 顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實驗。
d) 如果發現消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化。
e) 如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的*培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實驗。
2. 組織的消化：
不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
注意事項：
1．由于組織或細胞性質不同，實驗人員應依據具體情況，確定最佳消化時間；消化細胞時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁和生長狀況；
2．本產品不含抑菌劑，在使用過程中要特別注意無菌操作，避免消化液被微生物污染；
3．不宜4℃長期保存，切忌反復凍融，小量使用時建議分裝凍存；
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。