奧浦邁無血清雜交瘤細胞培養基HybriSFM-P1B

HybriSFM-P1B 是無血清、含低濃度蛋白、專門針對高密度雜交瘤細胞生長開發的培養基，適用于不同雜交 瘤細胞高密度懸浮培養和蛋白抗體表達。

應用范圍:HybriSFM-P1B 適用于科研和基于細胞培養的大規模生物制品的生產，但不可直接用于人體或作為藥物使用。

儲存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 

運輸：常溫（液體）、冷藏（干粉）

液體培養基配制方法：

1.取最終配制體積 90%的超純水，水溫 25~35℃（注：一次性配制體積不低于 1L）； 

2.稱量 16.61 g/L 干粉培養基，緩慢加入水中并攪拌； 

3.稱量 2.45 g/L 碳酸(空格)氫鈉，加入水中并持續攪拌；

4.攪拌 20 分鐘；加入 5N NaOH 調節 pH 直至完(空格)全溶解；加 5N HCl 將 pH 調回至 7.0；

5.加超純水校正到最終配積；用 NaCl 調節滲透壓到 320±10 mOsm/kg； 

6.繼續攪拌 10 分鐘，無菌過濾到合適容器。

干粉及液體培養基質量指標

產品指標                  HybriSFM-P1B Medium     HybriSFM-P1B DPM 

pH 值                       7.0~7.5                          7.0~7.5 

滲透壓(mOsm/kg)     300~340                         300~340 

溶解性                      ——                               按配制規程操作溶解良好 

內毒素(EU/mL)         ＜1.0                              ＜1.0 

無菌檢查                  應無菌生長                      ——

培養條件 ：37°C，5-10%CO2 

搖床設置：轉速 125-135 rpm

奧浦邁無血清雜交瘤細胞培養基HybriSFM-P1B

使用方法 

1. 直接轉換 

如果當前雜交瘤細胞已經是懸浮培養于無血清培養基中，大部分情況下，可以直接適應奧浦邁培養基，只需按照 日常傳代方式（稀釋）更換培養基即可。

2. 去血清馴化 

如果細胞目前培養于添加血清的基礎培養基中，則需要進行減血清馴化，下面為細胞馴化要點：

 1) 選用低代次，對數期細胞開始馴化； 

 2) 減血清可按照 10%、5%、2.5%、1%、0%的順序進行，在每個血清含量進行細胞傳代，直至細胞生長正 常，再進入下一個血清濃度。

3. 細胞傳代 

當雜交瘤細胞密度達到(2~3)x106 cells/ml 時，將細胞以(0.2~0.3)x106 cells/ml 接種于新的培養基中，繼續培養。 接種時無需離心，直接稀釋即可。

4. 流加批次培養生產抗體 

對于基礎培養基及其搭配補料，流加批次培養評價時沒有固定的最佳補料方案，針對每個細胞和產品都應該利用 DOE 方式進行流加批次培養工藝的建立和優化。推薦的使用方案如下（流加批次培養最高細胞密度可以達到 10 x106 cells/ml，抗體產量超過 2.5 g/L）：

1) 用于流加培養實驗的種子細胞密度約為 3 x 106 cells/ml，按(0.3~0.6)x106 cells/ml 密度接種； 

2) 建議每天取樣檢測細胞密度并進行生化分析。接種后第二天或第三天可以開始補料，之后按上表中提供的 策略，進行每天或隔天補料； 

3) 當糖溶度低于 3 g/L 的時候需要額外補加葡萄糖濃縮液至 6 g/L 終濃度。