T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase是一種來源于T4噬菌體的重組酶,屬于RecA/Rad51叢的酶,它在RPA反應中發揮關鍵作用。T4 UvsX重組酶具有典型的ABC三結構域,分別負責ATP結合,相互作用與DNA結合。它通過識別單鏈DNA上連續的6-8個核苷酸堿基,與DNA形成球狀多聚體結構。
T4 UvsX Recombinase由E.coli表達的重組蛋白,是將蛋白基因接入穩定表達載體,經克隆篩選,質量驗證,挑選的穩定表達株,由化學成分確定的培養基(不含有任何動物源成分)發酵制備,工藝穩定,保證了產品質量及批次間的一致性。
規格參數:
貨號:EH03501
規格:100ug/1mg/5mg/20mg
為工業客戶提供g級。
質量控制:
純 度: 經高效液相色譜(SEC-HPLC)和SDS-PAGE檢測,純度大于95%.
使用說明:
長期儲存于-80℃,首(空)次使用后保存于-20℃,避免反復凍融。
工作機理:
T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase在RPA反應中的主要作用是:
(1)穩定單鏈DNA
在常溫下,雙鏈DNA初變性為單鏈DNA后,T4 UvsX Recombinase立即識別并結合單鏈DNA,形成穩定的蛋白-DNA復合體,防止單鏈DNA再次回環成雙鏈。
(2)引物退火
在T4 UvsX Recombinase的保護下,引物與單鏈DNA進行退火,與之形成短的雙鏈DNA片段。
(3)替換與釋放
當聚合酶識別引物-模板雙鏈體并開始進行延伸時,T4 UvsX Recombinase被替換并釋放,使單鏈DNA完(空)全暴露,供聚合酶延伸。
(4)再循環
延伸產生的新合成DNA同樣暴露為單鏈,T4 UvsX Recombinase再次識別并結合,實現再循環,直至擴增完成。
T4 UvsX重組酶優點:
可在常溫下高效穩定單鏈DNA,這是RPA實現等溫擴增的關鍵。
與DNA的結合和釋放是反復可逆的,這使其在RPA反應中的再循環利用成為可能。
易于保存和純化,更利于RPA技術的商業化開發。
目前已有成熟的生產工藝,降低了RPA成本,有利于其廣泛應用。
T4 UvsX重組酶在RPA技術中主要應用如下:
1. RPA反應中的關鍵酶
T4 UvsX Recombinase在RPA反應中用于穩定和保護單鏈DNA,并在引物退火和聚合酶延伸過程中實現替換和再循環,這是RPA技術實現等溫擴增的關鍵。
2. 商業RPA試劑盒
許多商業RPA試劑盒中的重組酶成分主要由T4 UvsX Recombinase提供,如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。
3. POCT檢測試劑
RPA技術因其快速、簡便的優點,非常適合POCT。而T4 UvsX Recombinase的應用是實現RPA的POCT檢測試劑的關鍵。一些基于此的產品已用于臨床快速診斷,如Ebola病毒、Meningitis等的檢測。
4. 病原體核酸檢測
設計與特定病原體高度保守的基因片段同源的引物,與T4 UvsX Recombinase及RPA技術聯用,可實現病原體DNA/RNA的快速、高靈敏度檢測,用于臨床病原體感染的診斷。
5. 基因檢測與分型
針對特定的基因突變或多態性位點設計引物,與T4 UvsX Recombinase及RPA技術聯用,可用于相關基因型的檢測與分型,應用于遺傳病基因診斷等。
6. 體外核酸檢測
將與靶核酸同源的引物與T4 UvsX Recombinase及RPA技術聯用,可實現體外各種DNA、RNA的高通量檢測,如miRNA、circRNA的檢測等,用于生物學基礎研究與臨床診斷。
7. 轉基因生物檢測
設計特異性引物擴增轉基因片段,與T4 UvsX Recombinase及RPA技術聯用,可實現轉基因生物的快速檢測,用于食品安全等領域。
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