OPM-293 CD05 是完(空)全化學成分確定（Chemically-defined）的培養基，不含水解物、蛋白、生長因子及任 何動物來源的成分，適合于各種亞型 HEK293 細胞的高密度培養及高效率瞬時轉染。

訂購信息：

基礎培養基

補料培養基

其他 HEK293 系列培養基

應用范圍

OPM-293 CD05 即適用于科研應用，也適用于基于細胞培養的大規模生物藥生產，但不可直接用于人體或作為藥 物使用。

儲存運輸方法

儲存：2~8℃冷藏，干燥避光保存

運輸：常溫（液體）、冷藏（干粉）

液體培養基配制方法

1. 取潔凈的配制容器，建議一次性配制體積不低于 1L；

2. 加入最終配制體積 90%的超純水或注射用水，水溫控制在 25~35°C；

3. 稱量 19.86g/L 干粉培養基，緩慢加入水中攪拌 10 分鐘；

4. 稱量 2.22g/L 碳酸氫鈉，加入水中攪拌；

5. 緩慢加入 5N NaOH 調節 pH 到 8.3~8.5，攪拌 30 分鐘，此時應完(空)全溶解；

6. 緩慢加入 5N HCl 將 pH 調回至 7.0；

7. 定容到最終配液體積，繼續攪拌 5 分鐘，測 pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 將 pH 調回至 7.0；

8. 取樣測滲透壓，加入 NaCl 調節滲透壓至 275±10mOsm/kg（滲透壓計算公式：NaCl 添加量（g）=配液體積 （L）*（275-檢測值）/31.5）；

9. 繼續攪拌 10 分鐘，無菌過濾到合適容器，2~8℃避光保存。

干粉及液體培養基質量指標

培養條件

溫度 37℃，濕度 80%，5~8%CO2

搖床設置：轉速 115~125rpm（振幅 50mm）

細胞復蘇

1. 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷凍的細胞；

2. 將冷凍管中的細胞液全部轉移到含有 30mL 預溫過的 OPM-293 CD05 培養基的 125mL 搖瓶中；

3. 放入 37℃，5~8% CO2，轉速 115~135rpm（振幅 50mm），濕度 80%的搖床中培養

細胞傳代

1. 將 OPM-293 CD05 培養基放入 37℃條件下預熱 20-30min。

2. 取細胞密度≥3×10 6 ~ 4×10 6cells/mL、活率≥95%、處于對數生長期中期的細胞進行傳代；注意：不同類 型的 HEK293 細胞可能具有不同的對數生長期范圍。

3. 按接種密度為 0.3×10 6 ~ 0.6×10 6cells/mL。

4. 無菌轉移所需量的種子液至合適體積的搖瓶中，并添加所需體積的已預熱的 OPM-293 CD05 培養基。

5. 將搖瓶放入溫度 37℃，濕度 80%，轉速 110-150rpm（振幅 50mm），5%~8%CO2的細胞培養搖床中進行培養。 *每 2~3 天用新鮮的培養基按上述步驟進行傳代培養。

細胞馴化

直接接種法

1. 對于可以直接馴化的細胞，可以從無血清培養基中直接接種到 OPM-293 CD05 培養基中，接種密度參考傳 代步驟。

2. 繼續傳代細胞，直到細胞穩定生長。

3. 傳代幾代之后，細胞密度在接種的 3~4 天內達到 3×10 6cells/mL、細胞活性≥95%。此時，可以認為細胞 已被馴化成功。

梯度馴化法

1. 如果直接馴化效果不佳，請嘗試按照以下梯度馴化表格進行操作。

2. 選擇低代次的細胞，并確保細胞處于對數期。

3. 使用原始培養基培養細胞，并繼續使用原始培養基傳代 2~3 代，以實現穩定的細胞生長。

4. 在完(空)全使用 OPM-293 CD05 培養基接種 3~4 天之后，VCD 應該穩定達到 3×10 6cells/mL，細胞活性≥95%。 此時，細胞已經馴化到 OPM-293 CD05 培養基中。

轉染和瞬時表達

轉染條件應根據具體情況進行優化，可能需要通過 DOE 方法確定。以下轉染條件僅供參考

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